Inovace a diferenciace portfolia infekční diagnostiky Roche Pracovní dny Roche pro centralizovanou diagnostiku

Igor Klimíček, 20.5.2016

Roche cobas® e systémy Modulární koncepce umožňuje postavit řešení dle potřeb a přání zákazníka

cobas® 8000 Až 4 moduly cobas® e 801 Do 1200 výsledků/hod.

Počet modulů v systémech

Výk

on s

ysté

mů

cobas® e 411 Stolní analyzátor Do 85 výsledků/hod.

cobas® 6000 Max. 2 moduly cobas® e 601 Do 340 výsledků/hod.

Červen 2016!

cobas e flow Optimální efektivita provozu

Opakování reaktivních výsledků Ředění & Avidita Dva výsledky, jedno

hodnocení

Anti-HCV II

HBsAg II

Syphilis

HTLV I/II

Chagas*

HIV Duo*

HCV Duo*

HBsAg II quant II (dil)

Toxo IgG avidita

CMV IgG avidita

HIV Duo*

HCV Duo*

* Metody ve vývoji

HBsAg II

anti-HBs II

anti-HBc II – Q3/2016

anti-HBc-IgM

HBeAg

anti-HBe

HIV combi PT

HIV-Ag

anti-HAV-IgM

anti-HAV

CMV IgG

CMV IgM

HSV-1 IgG

HSV-2 IgG

Toxo IgM

Toxo IgG

Rubella IgM

Rubella IgG

HBsAg II quant. II

anti-HCV II

CMV IgG avidity

Toxo IgG avidity

Syphilis Elecsys nebo TPLA (c 501/c 502)

Portfolio ID Nejvíce se rozvíjející a inovující indikační skupina v současnosti

HTLV I/II

Syphilis - RPR (c 501/c 502)

Chagas – Q1/2017

HIV Duo (2.gen. e 801) – Q.1/2017

Syfilis Diagnostika

Přímá diagnostika • Vhodná jen pro manifestní stádia, nelze v latentní fázi – Treponema pallidum přítomna v

biologickém materiálu • Mikroskopie v zástinu, přímá imunofluorescence, PCR

Nepřímá diagnostika - průkaz protilátek v séru, plazmě a v likvoru • Treponemové testy (TPLA, TPHA, CLIA, ECLIA, konfirmace Western Blot)

• Specifická detekce protilátek TPP

• Netreponemové testy (RPR, VDRL) • Principem je průkaz nespecifických anti-kardiolipinových protilátek

• Většina pacientů asymptomatických!!!

http://www.szu.cz/tema/prevence/syfilis-tradicni-choroba-soucasny-problem-ii

Syfilis v ČR

• Vyhláška o lidské krvi č. 143/2008 Sb • klíčový parametr pro skrínink dárců krve: Transfúzní oddělení –

povinný treponemový test

• Vyhláška č. 306/2012 Sb. § 7 odst. 2 - povinně treponemový a netreponemový

• Prenatální screening • Screening novorozenců • Předoperační vyšetření • Hospitalizace

Kompletní plně automatizovaný Roche panel pro testování Syfilis

Treponemové testy • Elecsys Syphilis • TPLA / TPLA 2 (Sekisui)

Netreponemový test • RPR / RPR 2 (Sekisui)

Netreponemový test • RPR / RPR 2 (Sekisui)

Treponemové testy • Elecsys Syphilis • TPLA / TPLA 2 (Sekisui)

TPLA/RPR (generace 1)

Nádobky pro použití na Modular P

Pouze u TPLA je možné převést reagencie do kazety „Multipack“ pro použití na c501/502

TPLA2/RPR2 (generace 2)

Kazety výlučně pro cobas c 501/502

→ Již ne pro Modular P !

phase out phase in

26 May 2016 page 9 © 2009 Roche

Mediace RPR / RPR2

Netreponemové metody Automatizace pouze Sekisui/Roche

VDRL Oxoid

RPR Biokit

RPR card test Becton Dickinson

Manual

VDRL Oxoid

RPR card test Omega, BioRad, LTA

Manuální

Mediace RPR, Mediace RPR2 Sekisui/Roche

Automatizovaná

Aglutinační metody

Mediace RPR – formát metody Imunoturbidimetrický aglutinační test

＋ Ｙ Ｙ Ｙ

Agregace

Mediace RPR

＋ Ｙ Ｙ Ｙ

RPR card test

Latexové částice

Karbonový prášek

Lipidové Antigeny (Cardiolipin, Lecithin)

Visuální odečítání

Optické měření

Positivní sérum

Positivní sérum

Netreponemové metody Automatizace pouze Sekisui/Roche

Metoda Mediace RPR RPR card test VDRL

Příprava Ready to use Míchání antigenní suspenze

TAT 10 min 10-12 min 10-12min

Výkon

350 testů/hod.

(Roche/Hitachi917)

600 testů/hod.(c50x)

60 testů/hod.

(expert)

100 testů/hod.

(expert)

Konsistence odečítání výsledků

Velmi dobrá V závislosti na individuáních schopnostech

Lidská chyba Minimalizována Vyšší výskyt

Riziko infekce Minimální Vyšší výskyt

Specializovaný trénink Není nutný Nutný

manuální metody automatizovaná

Osato K et al, Japanese Journal of Sexually Transmitted Diseases 2002; 13(1):124-130 Kawai K et al, The Journal of Clinical Laboratory Instruments and Reagents 2003; 26(4): 301-304

Cekově 187 pozitivně konfirmovaných vzorků pacientů v různých stadiích onemocnění bylo testováno.

Sensitivita v rámci těchto vzorků = 99.5%

n Mediace RPR

Positivní Negativní

Syphilis konfirmované

positivní vzorky 187 186 1

Mediace RPR – klinická sensitivita Vysoká sensitivita 99.5% - pro spolehlivou diagnostiku

Mediace RPR – klinická specifičnost Vysoká specifičnost 99.5% - méně retestování

Kinjo T et al,. Japanese Journal of Clinical Laboratory Automation (JJCLA), 2005; 30(3): 257-262

Celkově testováno 2639 syphilis negativních vzorků.

Specifičnost s těmito vzorky = 99.5%

n Mediace RPR

Positivní Negativní

Syphilis negativní vzorky 2639 12 2627

Netreponemové metody Obecné rysy

• Screening a zejména posouzení aktivity onemocnění a sledování úspěšnosti léčby (vždy spolu s treponemovými testy)

• 2-10% falešně pozitivních výsledků

• u pacientů s virovými infekcemi, příušnicemi, infekční mononukleózou, planými neštovicemi, ale také u těhotných, uživatelů drog a po očkování

• výskyt falešně negativních reakcí

• v počátku onemocnění před sérokonverzí

• u pozdní latentní syfilis představuje až 30% případů

• zonální fenomén u akutní syfilis (1 až 2% případů) Zákoucká, H. (2007). Syfilis - tradiční choroba, současný problém II. Zprávy CEM (SZÚ, Praha).16(10-11): 493 - 497.

Mediace RPR2 na c 501 Lokální zkušenosti

• Souprava nevyžaduje manuální zásah uživatele

• Kalibrace pětibodová na šarži

• Kalibrační stabilita > 4 měsíce, QC v deklarovaném rozmezí

• Stanovení vzorků z rutinní praxe

• 100% shoda s jinými metodami RPR u negativních(61 vzorků)

• byly zaznamenány jak neshody mezi různými typy metod, tak u hodnocení NRL u pozitivních vzorků = časná nebo latentní fáze onemocnění

Mediace RPR2 na c 501 Lokální zkušenosti

Organizace EHK v ČR NRL pro diagnostiku Syfilis, SZÚ Praha, EHK č. 876/2015

Vzorek

Výsledek Elecsys® Syphilis

Hodnocení NRL

Výsledek Mediace® RPR 2

Hodnocení NRL

COI

Hodnocení Stanovení č.1, R.U.

Stanovení č.2, R.U.

Hodnocení

A 180,9

reaktivní pozitivní 39,03 35,6

reaktivní pozitivní

B 170,3

reaktivní pozitivní 2,71 2,63

reaktivní pozitivní

C 170

reaktivní pozitivní 2,53 2,55

reaktivní pozitivní

D 107

reaktivní pozitivní <0,50 <0,50

negativní pozitivní

E 0,101

negativní negativní 0,79 0,73

negativní negativní

Elecsys® HIV combi PT

Design metody Elecsys HIV combi PT

Elecsys ® HIV combi PT Pokročilý design metody pro zvýšení bezpečnosti stanovení

Pokročilý design metody:

1. Pre-treatment (PT) krok : Lýza viru vedoucí ke zvýšené sensitivitě detekce p24 antigenu

2. Anti-p24 protilátky šité na míru: Včasná detekce infekce, pozdní infekce, a detekce p24 antigenu odvozeného od HIV-1 skupiny M, O a HIV-2 3. Pouze Elecsys HIV combi PT disponuje modulem s antigeny reverzní transkriptázy(RT)

4. „Chaperone antigen“ technologie

• Evaluace analytické sensitivity dle p24 WHO referenčního standardu

• Sensitivita = průměrná hodnota z měření třech různých šarží

Bezpečnost Vysoká analytická a sérokonverzní sensitivita

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

2

0

4

6

8

10

Elec

sys

HIV

com

bi P

T (C

OI)

WHO hodnoty standardu (IU/ml)

Sensitivita 1.05 IU/ml při COI 1.0

Lepší sensitivita = časnější detekce infekce

Příbalový leták zajišťuje anal. sensitivitu ≤2 IU/ml

Elecsys ® HIV combi PT Pokročilý design metody zvyšuje bezpečnost stanovení

3. Pouze Elecsys HIV combi PT disponuje modulem s antigeny reverzní transkriptázy(RT): •RT region genomu je nejodolnější vůči různým mutacím, identický u různých variant virů

•Detekce všech hlavních skupin genotypů a jejich subtypů, rekombinantních forem, mutantů a HIV-2

Muhlbacher et al. Med Microbiol Immunol 2012

4. „Chaperone antigen“ technologie Optimalizovaný design nativních 3-D struktur a vystavění epitopů gp41 a gp36 pro zvýšení sensitivity.

Chaperone Target

Target

Chaperone Target Chaperone

„Chaperone Carrier Concept“ published in Scholz et al., J. Mol. Biol. (2005) 345, 1229-1241 & Scholz et al., Biochemistry (2006) 45, 20-33;

Chaperone molekula

Virový antigen

Elecsys ® HIV combi PT Pokročilý design metody zvyšuje bezpečnost stanovení

Rekombinantní antigeny HIV v nativní konformační struktuře

26

Spolehlivost a bezpečnost Detekce všech důležitých skupin a jejich subtypů

Elecsys HIV combi PT (reaktivní/positivní)

HIV-1 skupina M, subtypy 629/629

A, A1, A2, A/B, A/C, A/E/C, CRF02_AG B, B/A, B/C, CRF14_BG C, C/A, C/B, C/E D E, E/A/C, E/C, E/D, CRF01_AE (=E) F F1 G H J CRF06_cpx CRF11_cpx CRF13_cpx

72/72 262/262 168/168 16/16 59/59 7/7 2/2

16/16 1/1 1/1 1/1 1/1 3/3

HIV-1 skupina O 8/8

HIV-2 472/472

Data z CE evaluační studie Elecsys HIV combi PT

Data z CE evaluační studie Elecsys HIV combi PT

Centrum evaluace Dárci krve Neselektované rutinní

vzorky(dialýza, těhotenství)

Bangkok 99.93% (n=1500) Dolo 99.87% (n=1485) Innsbruck 99.86% (n=2834) Santiago 99.87% (n=1524) Lausanne 100.00% (n=305) Lisbon 99.78% (n=467) Mönchengladbach 99.80% (n=1000) Munich 99.42% (n=700) Sydney 100.00% (n=249)

Průměrná specifičnost (95% CI)

99.88% (99.77–99.94)

99.74% (99.47–99.90)

Spolehlivost a efektivita Vysoká klinická specifičnost u dárců a pacientů

Elecsys® Anti-HBc II

Elecsys® Anti-HBc II Vylepšená klinická specifičnost

• Cíl projektu: zvýšit specifičnost Elecsys Anti-HBc(99,7% dárci, pacienti – neuvedeno)

• 100 testů / 200 testů v balení

• Formát metody: podobný se současnou generací, 27 min.

• Uvedení plánováno na Q3 2016

• Předběžné výsledky na dalších slidech

Elecsys® Anti-HBc II Předběžná data Klinická sensitivita Celkem 793 vzorků pacientů.

Stupně onemocnění n reactive Chronická nebo akutní HBV infekce (Anti-HBc positive, HBsAg positive)

568 568

Prodělaná HBV infekce (Anti-HBc positive, HBsAg negative, Anti-HBs positive, Anti-HBe negative)

56 56

Prodělaná nebo vyléčená HBV infekce (Anti-HBc positive, HBsAg negative, Anti-HBs negative, Anti-HBe positive)

9 9

Prodělaná nebo vyléčená HBV infekce (Anti-HBc positive, HBsAg negative, Anti-HBs positive, Anti-HBe positive)

160 160

Klinická sensitivita metody Elecsys Anti-HBc II byla v této studii 100%

Elecsys® Anti-HBc II Předběžná data Klinická specifičnost Celkem 20101 vzorků.

Kohorta n Klinická specifičnost

(%) 95% confidence limit

(%) Dárci krve (serum) 8163 99.93 99.84-99.97 Dárci krve (EDTA plasma)

9162 99.88 99.78-99.94

Rutinní hospitalizovaní pacienti

997 100.00 99.60-100.00

Dialyzovaní pacienti 779 99.31 98.25-99.81 Těhotné ženy 1000 100.00 99.62-100.00

Specifičnost Elecsys Anti-HBc II by mohla být signifikantně vylepšena oproti současné první generaci metody(99,6% - iniciačně reaktivní, 99.7% - opakovaně reaktivní u dárců)

HBsAg II

anti-HBs II

anti-HBc II – Q3/2016

anti-HBc-IgM

HBeAg

anti-HBe

HIV combi PT

HIV-Ag

anti-HAV-IgM

anti-HAV

CMV IgG

CMV IgM

HSV-1 IgG

HSV-2 IgG

Toxo IgM

Toxo IgG

Rubella IgM

Rubella IgG

HBsAg II quant. II

anti-HCV II

CMV IgG avidity

Toxo IgG avidity

Syphilis Elecsys nebo TPLA (c 501/c 502)

Portfolio ID Nejvíce se rozvíjející a inovující indikační skupina v současnosti

HTLV I/II

Syphilis - RPR (c 501/c 502)

Chagas – Q1/2017

HIV Duo (2.gen. e 801) – Q.1/2017

Doing now what patients need next