Experimentáln navozenáanafylaktická reakce u pokusného

zví ete

Imunitní systém

• Schopnost rozpoznatcizí ástice odvlastních a reagovatproti nim

• Základní funkce– Obranyschopnost

(odpov organismu naohrožení)

– Homeostáza (odstra ování starých apoškozených bun kudržení strukturální afunk ní integrity)

• Orgány imunitníhosystému- centrální (kostní d ,brzlík)- periferní (lymfatickéuzliny, slezina, mimouzlinoválymfatická tká )

Bu ky imunitního systému

Složky imunitního systému

• B-lymfocyty– tvorba protilátek (Ig)- 5 t íd (IgG, IgA, IgE, IgM, IgD)

• T-lymfocyty– p ímá likvidace bun k napadených mikroorganismy– regulace funkce ostatních bun k

• Fagocyty– specializované bu ky schopné pohlcovat a ni it cizí ástice

- polymorfonukleáry (neutrofilní granulocyty)- monocyty

• Komplement– kaskáda bílkovin vedoucí k rozpadu bu ky– p ivolání dalších bun k– ozna ení patogen pro fagocytózu– aktivace a degranulace mastocyt

Reakce imunitního systému

• Fyziologické- obranná reakce = zán t(soubor reakcí tkání napatogenní podn t s cílemodstranit p inu, poškozenétkán a obnovení p vodníhostavu) Akutní zán t

• Patologické– autoagresivní reakce

- chronický zán t- alergie, autoimunitní reakce- odhojení transplantované tkán

Poruchy imunitního systému

• Imunodeficity- neschopnost fyziologické imunitní reakce- snížená obranyschopnost

- primární (deficit n které ze složek imunitního systému)- sekundární (infekce HIV, chronické infekce, ozá ení, chemoterapie,nádory,..)

• Reakce p ecitliv losti (hypersenzitivita)- alergie- chronické zán ty- autoimunitní nemoci

Základní pojmy k hypersenzitivnímreakcím

• Hypersenzitivita – nadm rná,nep im enáaktivace imunitního systému

• Alergie – neadekvátn zvýšená reakce na ur itýantigen (alergen) z prost edí

• Anafylaxe (Anafylaktický šok) – generalizovaná,život ohrožující reakce se sou asným postižením víceorgánových systém .

• Atopie – vrozená dispozice k rozvojihypersenzitivní reakce I.typu

Klasifikace hypersenzitivních reakcí(dle Gella a Coombse)

• Typ I – asná/okamžitá reakce, zprost edkovanáprotilátkami typu IgE

• Typ II – cytotoxická reakce, primárnzprost edkovaná IgG nebo IgM a komplementem

• Typ III – zprost edkovaná imunokomplexy(IgG/IgM)

• Typ IV – pozdní, bu kami zprost edkovaná

• Typ V – zprost edkovaná antireceptorovými protilátkami

Hypersenzitivita II. typu

• Cytotoxická, zprost edkovaná protilátkami typu IgGnebo IgM proti antigen m na povrchu bun némembrány destrukce bu ky

1. Komplementem zprost edkovaná destrukce bun k cytolýza,fagocytóza

2. Imunoglobuliny zprost edkovaná (ADCC)

- Antigen – p irozená sou ást b.membrány (cizorodá bu ka) x cizorodábílkovina na povrchu b.membrány (virový protein)

- endogenní antigeny i exogenní chemické látky (léky)- reakce po aplikaci n kterých lék (p . hemolytická anemie,

trombocytopenie, granulocytopenie)

Hypersenzitivita III.typu

• tvorba imunokomplex (Ag-Ig) –IgG n. IgM proti rozpustnýmantigen m

• cirkulace v ob hu• p irozená fagocytóza (makrofágy)• nedostate ná fce imunitního

systému – perzistence v cévníchst nách a tkáních – aktivacekomplementu – lokální zán tliváreakce

• glomerulonefritida, vaskulitida• Generalizovaná forma – akutní

sérová nemoc

Hypersenzitivní reakce IV.typu

• Pozdní, zprost edkovaná antigen-specifickými T-bu kami

1. Fáze senzibilizace- penetrace antigenu (haptenu) pokožkou p íjem a zpracováníantigenu APC (Langerhansovy bu ky) migrace lymfatickými cévami doregionálních uzlin aktivace T- bun k produkce pam ových T-bun k

transport do k že

2. Efektorová fáze (opakovaná expozice antigenu)- zachycení antigenu APC p edložení antigenu senzibilizovanýmpam ovým bu kám (T-bu ky) sekrece cytokin z T-bun k (IFN- ,IL-17) aktivace a migrace monocyt do poškozené tkán – p em nav makrofágy lokální tká ová reakce

Charakteristické projevy

• kontaktní dermatitida– kosmetické p ípravky, léky, kov (nikl, chrom)

• Koch v fenomén– reakce na tuberkulinový test – po s.c. aplikaci –

u senzibilizované osoby projevy lokální reakce(z ervenání)

• farmá ská plíce– pneumonitida – inhalace org.látek– námahová dušnost, kašel, hore ka,..

Hypersenzitivita typu I

- Imunopatologická reakce I.typu zprost edkovanáIgE

• Alergie – lokalizovanáreakce (slizni ní kontakt salergenem)- atopická rýma- bronchiální astma- potravinové alergie- atopická dermatitida

• Anafylaxe – závažná,systémová, potenciáln životohrožující reakce(parenterální p ístupalergenu)

Patogeneze alergických reakcí

iny anafylaktické reakce

• IgE depend.mechanismy- Hmyzí jed- Potraviny, potravní aditiva- Léky- Sezónní alergeny - pyl,

prach,..- Latex- Biologické materiály

• Idiopatická anafylaxe

• Anafylaktoidní reakce- Fyzikální faktory (cvi ení,

chlad, teplo, UV,..)- Léky (opiáty)- Etanol

Klinické projevy

• Závisí na:• Stupni senzibilizace pacienta• Míst vstupu alergenu do

organismu• Typu alergenu a jeho potenci

Klinické projevy

• Celkové - úzkost, neklid, slabost,parestézie, sucho, abnormální chu vústech

• K že, sliznice – sv ní, zarudnutí,kop ivka, otok okolo o í, jazyka, rt ,..

• GIT – nausea, zvracení, pr jem,ovité bolesti b icha

• Respira ní trakt – otok horních cestdých., bolest na hrudi, dušnost,bronchospasmus, kašel, hypoxemie,centrální cyanóza

• KVS – hypotenze, tachykardie, arytmie,ob hové selhání, bledost, kardiogenní šok,otok plic, zástava srdce

• UGT – inkontinence mo i• CNS – poruchy zrakového vnímání, bolest

hlavy, poruchy v domí

Terapie

• Symptomatická- antihistaminika- kortikosteroidy – orální, lokální- blokátory cyklooxygenázové dráhy- bronchodilatanty - inhala

• Celková- epinefrin (adrenalin) (i.v.)

• Prevence– vylou ení alergenu z prost edí- desenzibilizace, specifická imunoterapie- aplikace epinefrinu (self-injected)

Praktikum

Cíl praktika

Opakovaná aplikace antigenu (ko ské sérum) s.c. po 3 dnech

Za 3 týdny od za átku senzibilizace

Odb r krve v.auricularis (2ml + heparin) na hematologickévyšet ení

Aplikace 3 ml ko ského séra i.v.

1. Odb r krve z v.auricularis, p íp. intrakardiáln (2ml + heparin) nahematologické vyšet ení.

2. Zhotovení nát ru periferní krve.3. Stanovení po tu krevních element (leukocyty, trombocyty,

eozinofily).

Úkoly a provedení

• Sledování pr hu anafylaktické reakce (videozáznam)

• Srovnání po tu krevních element (p ed a po prob hléreakci)

• P íprava a zhodnocení nát ru periferní krve (ze vzorked a po anafylaxi)

Stanovení po tu krevních element

I. Hematologickéautomaty

II. Mikroskopicky(po ítací kom rky)

• Leukocyty• Trombocyty• Eozinofilní granulocyty

Zp sob po ítání krevních element

Leukocyty

Pot eby:• Krev• Türk v roztok• Sklen ná bani ka se zátkou• Mikropipety• Bürkerova kom rka s krycím

sklí kem• Mikroskop

Postup:• Do bani ky p eneseme 475 l

Türkova roztoku, p idáme 25l krve.

• Uzav eme zátkou, šet npromícháme a necháme 2-3min.stát.

• Naplníme Bürkerovu kom rku.• Po ítáme 50 tverc a

násobíme100x

L= 50…..x 100(po et Leu/1 l)

Trombocyty

Pot eby:• Krev• Prokain• Bani ka se zátkou• Mikropipety• Bürkerova kom rka• mikroskop

Postup:• Do bani ky s prokainem p idáme

25 l krve, ekáme 20 min. nahemolýzu Ery.

• Prot epeme, naplníme Bürkerovukom rku.

• Po ítáme ve 20 obdélnících.T= 20…..x 1000 (po et Trb/ 1

l)

lov k …. 150-300 tis./ lKrálík …..cca 130 tis.-1 mil./ l

Eozinofily

Pot eby:• Krev• Dunger v roztok• Mikropipety• Bani ka se zátkou• Bürkerova kom rka• mikroskop

Postup:• Do bani ky s 475 l Dungerova

roztoku p idáme 25 l krve, 15min. ekáme na obarveníeozinofil .

• Promícháme a naplnímeBürkerovu kom rku.

• Po ítáme na celé ploše kom rky.Eo= 20 x 11,1 (po et x 103/ 1 l)

íprava krevního nát ru

Granulocyty

• Eosinofilní- Dvojlalo natá jádra- Specifická granula (barví se

eosinem)- obsahují enzymy,cytotoxické proteinycytokiny

- Vyšší množství ve sliznici st ev,plic a v k ži

Granulocyty

• Basofilní- Lalo naté jádro, p ekryté

granuly- Specifická granula – obsahují

histamin, heparin a další látky

Granulocyty

• Neutrofilní- Jádro -2-5 lalok -spojena

filamenty- Cytoplazma – sv tlá, specifická i

nespecifická granula- Azurofilní granula- Schopnost fagocytózy

Funk ní vývoj neutrofilních granulocyt

Agranulocyty

• Lymfocyty- B – lymfocyty (15%)- T – lymfocyty (80%)- Nulové bu ky (5%)- jádro – kulaté/oválné- Cytoplazma – tenký proužek

Agranulocyty

• Monocyty- Oválné nebo podkovovité jádro- Cytoplazma – modrošedá –

granula- Nezralá forma makrofág

(tkán )

Diferenciální rozpo et leukocyt

• Stanovení procentuálníhozastoupení jednotlivýchdruh bílých krvinek

• Po et jednotlivých druh seur uje nejmén na 100 Leu

• Ur uje se v nát ru obarvenémLeuko difem 200

• Roložení Leu v nát ru jenerovnom rné

prohlížet nát r meandrovit

– V tší Leu – na okrajích(mono, Eo)

– Menší – ve st edu (lymfo)

Procentuální zastoupení jednotlivýchdruh bílých krvinek

Diferenciální rozpo et u laboratorníhokrálíka

• Po et leukocyt …cca 6-12 tis.mm-3

- Neutrofilní granulocyty 8-50%

- Eosinofilní granulocyty 1-3%

- Bazofilní granulocyty 1-8%

- Lymfocyty 20-90%

- Monocyty 1-4%

Záv r

• Záznam výsledk vyšet ení periferní krve do tabulky• Srovnání hodnot p ed a po anafylaxi

kuji za pozornost