Strukturní analýza proteinů

pomocí rentgenové

difrakceJan Hrach, Veronika Mašková

Osnova

Proteiny

• složené z aminokyselin

• základ živých organismů

• funkce zásobní katalytická

(enzymy) regulační

(hormony) obranná transportní

(hemoglobin) stavební• 1967 vyřešena

první struktura enzymu lysozym

Krystalizace

A – krycí víčkoB – krystalizační kapkaC – rezervoárD – matečný roztok

• difuzní metody metoda visící

kapky metoda sedící

kapky

• v krystalizační kapce je menší koncentrace roztoku než v rezervoáru difúze par z kapky do rezervoáru růst koncentrace roztoku v kapce

Růst krystalu

potvrzení krystalu proteinu• metody– destruktivní• absorpce barviva• dehydratace• drcení

– nedestruktivní• polarizace• fluorescence pod UV zářením• rentgenová difrakce

Difrakce

Difraktometr na FZÚ AV v Cukrovarnické ulici

Vlastní práceCíle

1. krystalizace proteinu2. sběr difrakčních dat3. řešení struktury proteinu

1. Krystalizacelysozym c = 120 mg/mlNaCl c = 1Moctan sodný c = 0,1M polzethylen glykol 30%

Fázový diagram

protein

NaCl

120 mg/ml

90 mg/ml

60 mg/ml

30 mg/ml

10 mg/ml

0,1M 0,2M 0,5M 1M 2M 3,6M

Potvrzení krystalu proteinu

Lovení a mražení krystalů

velikost smyčky: 400 μm

2. Difrakce

Difrakční snímek více krystalů

3. Vyřešená struktura proteinu

Závěr

• Vypěstovali jsme krystaly proteinu a ověřili fázový diagram.

• Nasbírali jsme soubor difrakčních dat

• Vyřešili jsme strukturu lysozymu

Poděkování

• Ing. Monika Kučeráková (FÚ AV ČR)• Ing. Jan Stránský (ÚMCH)• Leona Švecová (KIPL FJFI)• organizátoři Týdne vědy

Děkujeme za

pozornost!