Test

y ek

otox

icity

s ry

bam

i

Test

y to

xici

ty n

a ry

bích

mod

elec

h

Aku

tní t

esty

toxi

city

Pro

long

ovan

é te

sty

toxi

city

Chr

onic

ké te

sty

toxi

city

Test

y to

xici

ty n

a ry

bích

em

bryí

ch a

potěr

uE

mbr

yoná

lní t

esty

Em

bryo

larv

ální

test

y

Test

y ov

livně

ní rů

stu

na n

edos

pělý

ch ry

bách

Test

y bi

oaku

mul

ace

Che

mic

ké lá

tky

a ch

emic

ké příp

ravk

y –

hodn

ocen

í vla

stno

stí n

ebez

pečn

ých

pro

živo

tní p

rostře

dí•

Zák.

č. 3

56/2

003

Sb.

O c

hem

ický

ch lá

tkác

h a

chem

ický

ch příp

ravc

ích

•M

etod

y pr

o zk

ouše

ní v

last

nost

í lát

ek a

příp

ravků

uved

eny

v čá

stiI

. příl

ohy

č.2

Vyh

lášk

y M

ŽP č

. 222

/200

4 S

b., k

tero

u s

u ch

emic

kých

láte

k a

příp

ravků

stan

oví z

ákla

dní m

etod

y pr

o zk

ouše

ní fy

ziká

lně-

chem

ický

ch v

last

nost

í, vý

bušn

ých

vlas

tnos

tí a

vlas

tnos

tí ne

bezp

ečný

ch p

ro ž

ivot

ní p

rostře

dí

•-a

kutn

í tox

icita

pro

ryby

•-b

ioak

umul

ace

–průt

okov

á zk

oušk

a na

rybá

ch•

-růs

tu n

a ne

dospěl

ých

rybá

ch•

-tox

icity

na

rybí

ch e

mbr

yích

a p

otěr

u –

krát

kodo

bá z

kouš

ka

Aku

tní t

esty

ČS

N E

N IS

O 7

346-

1 (7

5 77

61) J

akos

t vod

–S

tano

vení

aku

tní l

etál

ní to

xici

ty

láte

k pr

o sl

adko

vodn

í ryb

y B

rach

ydan

iore

rioH

amilt

on-B

ucha

nan

(Tel

eost

ei,

Cyp

rinid

ae) –

Čás

t 1: S

tatic

ká m

etod

a

ČS

N E

N IS

O 7

346-

2 (7

5 77

61) J

akos

t vod

–S

tano

vení

aku

tní l

etál

ní to

xici

ty

láte

k pr

o sl

adko

vodn

í ryb

y B

rach

ydan

iore

rioH

amilt

on-B

ucha

nan

(Tel

eost

ei,

Cyp

rinid

ae) –

Čás

t 2: O

bnov

ovac

í met

oda

ČS

N E

N IS

O 7

346-

3 (7

5 77

61) J

akos

t vod

–S

tano

vení

aku

tní l

etál

ní to

xici

ty

láte

k pr

o sl

adko

vodn

í ryb

y B

rach

ydan

iore

rioH

amilt

on-B

ucha

nan

(Tel

eost

ei,

Cyp

rinid

ae) –

Čás

t 3: P

růtočn

á m

etod

a

OE

CD

203

: Tes

t aku

tnít

oxic

ity n

a ry

bách

–vý

sled

kem

je k

once

ntra

ce, k

terá

vyvo

lá50

% ú

hyn

ryb

(96h

LC

50)

Pou

žíva

né d

ruhy

Pimephalespromelas

(stře

vle)

Cyprinuscarpio

(kap

r obe

cný)

Oncorhynchusmykiss

(pst

ruh

d

Brachydaniorerio

(dan

iopr

uhov

aný)

Poeciliareticulata

(živ

orod

ka d

uhov

á,

paví

očko

)

Daniorerio

(dan

iopr

uhov

ané,

zebř

ička

pru

hova

ná)

Cho

v ry

b pr

o te

sty

Stře

vle

potočn

í Stře

vle

potočn

í ((Pimephales

promelas

)•

mal

á, m

alé

náro

ky n

a pr

osto

r•

mim

otěl

ní v

ývoj

•ši

roké

rozm

ezí t

eplo

t i sl

anos

ti•

snad

ná k

ultiv

ace

v la

bora

toři

•kr

átká

gen

erač

ní d

oba

•te

sty

rela

tivně

levn

é

Dan

iopr

uhov

aný(Brachydaniorerio

)

•Zn

ámý

geno

m, d

obře

cha

rakt

eriz

ovan

ý dr

uh

•Ti

síce

mut

antn

ích

druhů

•D

obře

pop

saný

mod

el v

ývoj

e ob

ratlo

vců

•M

odel

y pr

o ně

kter

á lid

ská

onem

ocně

nía

poru

chy

•Č

eleď

: Cyp

rinid

ae-k

apro

vití

Půvo

d: A

sie

Vel

ikos

t: do

4 c

mTe

plot

a: 2

0 -2

6 °C

pH: 6

,5 -

7,5

Tvrd

ost v

ody:

5 -

12 °d

KH

Potra

va: v

šežr

avec

(vločk

ové

krm

ivo,

nitě

nky,

daf

nie)

Roz

mno

žová

ní: S

ameč

ci js

ou v

ybar

veně

jší a

opr

oti s

amič

kám

dor

bněj

ší.

Roz

mno

žují

se v

e vě

tší,

hodně

zaro

stlé

, nád

rži s

níz

kou

hlad

inou

vody

, při

tepl

otě

okor

o25

°C. N

a vy

tírac

í nád

rž b

y měl

o do

pada

t den

ní sv

ětlo

. Nej

dřív

edo

nád

rže

umís

tíme

sam

ičku

a a

ž po

něk

olik

a dn

ech

přid

áme

sam

ce. P

okud

jsm

e by

li ús

pěšn

í, sa

mič

ka n

akla

de n

a ro

stlin

y až

500

jike

r. Po

těr s

e líh

ne p

o dv

ou d

nech

a

sobě

stač

ný je

po

dalš

ím d

ni.

halančíkjaponský

(Oryziaslatipes

):

•Zc

ela

průh

ledn

á va

jíčka

•D

ostu

pné

kříž

ené

/tran

sgen

ní/m

utan

tníd

ruhy

•Zn

ámý

geno

m•

X-Y

urč

ení p

ohla

ví L

ow

tum

or b

ackg

roun

d•

Sens

itivn

í odp

ověď

na

xeno

biot

ika

Test

aku

tní t

oxic

ity n

a ry

bách

Úče

l:Te

st s

louž

í ke

stan

oven

í vliv

u lá

tek

a od

padn

ích

vod

na c

hová

nía

přež

íván

í ryb

. P

rinci

p:Te

st s

počí

vá v

e sl

edov

ání c

hová

ní a

pře

žívá

ní ry

b v

odst

upňo

vaný

ch

konc

entra

cích

test

ovan

é lá

tky

po d

obu

48 a

ž 96

hod

in

Brachydaniorerio

(2,5

-3,5

měs

íců,

2,5

-3,5

cm

, 21-

25o C

)Poeciliareticulata

(1,5

-2,5

cm

, 3-3

,5 měs

íce,

21-

25o C

) Cyprinuscarpio

(2,5

-3,5

cm

, 20-

24o C)

Oncorhinchusmykiss

(4,5

-5,5

cm

, 13-

17o C

)

Dal

ší d

ruhy

: Oryziaslatipes

(hal

ančí

kja

pons

ký), Lepomis

macrochirus

(slu

nečn

ice

mod

rá), Leuciscusidus

(jele

c je

sen)

Při

náku

pu n

utná

akl

imat

izac

e 10

-14

dni,

stan

dard

ní k

rmen

í, ch

ov ja

ko při

test

uD

o te

stu

–buď

jen

jedn

o po

hlav

í neb

o vy

rovn

aný

poče

t po

hlav

í

Test

y ak

utní

toxi

city

na

rybá

chPo

dmín

ky te

stu:

Tepl

ota

23±2

°C, o

svět

lení

12-1

6 ho

d 2

000

lux,

48

hod

pře

d te

stem

pře

stat

krm

it, běh

em te

stu

bez

krm

ení;

bez

aera

ce,

expo

zice

96

h m

in. 1

00 m

l/jed

ince

, 3-1

0 je

dinců/

konc

entra

ci

Lim

itnít

est:

kont

rola

a 1

00 m

g/L,

3-5

ryb/

konc

entra

ciO

rien

tačn

ítes

t(př

edbě

žná

zkou

ška)

:3-5

ryb/

500m

l, ně

kolik

kon

cent

rací

-cíl:

zís

kat i

nfor

mac

e o

rozs

ahu

konc

entra

cípr

o hl

avní

zkou

šku

Zák

ladn

ítes

t (hl

avní

zkou

ška)

:7-1

0 ks

ve

3 lit

rech

, 3 o

pako

vání

, 5 -

10

konc

entra

cí

Usp

ořád

ání:

stat

ické

, sem

ista

tické

–ob

sádk

a m

ax. 1

g n

a L

průt

okov

ý sy

stém

–m

ožno

vyš

šíob

sádk

a

Aku

tní t

est

Par

amet

ry s

ledo

vané

v p

růbě

hu te

stu

•pH

, tep

lota

, O2

•zm

ěny

chov

ání (

aktiv

ita, n

eklid

, trh

avé

pohy

by a

pod.

)

•m

orta

lita

po 2

4, 4

8,72

h

•N

a ko

nci t

estu

-le

talit

a –

stan

oven

í 96L

C 5

0

Po

ukonče

ní te

stu

jsou

pok

usné

org

anis

my

usm

rcen

y ox

idem

uhl

ičitý

m d

le z

ákon

a Č

NR

č. 2

46/1

992

Sb

na

ochr

anu

zvířa

t pro

ti tý

rání

.

Exp

erim

entá

lníd

esig

n pr

ote

sty

toxi

city

Pře

koná

nípr

oble

mů

stat

ické

hode

sign

u: 1

. Zvý

šení

obj

emu

Pře

koná

nípr

oble

mů

stat

ické

hode

sign

u: 2

. Sem

i-sta

tické

upořá

dání

(o

bnov

ovac

í)

Pro

long

ovan

é te

sty

toxi

city

na

rybá

ch

OE

CD

č. 2

04: P

rolo

ngov

aný

test

toxi

city

na

rybá

ch–

výsl

edke

m

je k

once

ntra

ce, k

terá

vyvo

lá50

% ú

hyn

ryb

za d

obu

půso

bení

14

dnů

(14d

LC

50) a

kon

cent

race

, kte

ráne

způs

obuj

e po

škoz

enír

yb

(NO

EC

)

Exp

ozic

e 14

dnů

(OE

CD

-14

dnů,

ISO

21

dnů)

Pod

le ji

ných

nor

em -

doba

trvá

níte

stu

2 –

4 tý

dny

běhe

m te

stu

krm

eno

sem

ista

tická

nebo

prů

točn

áex

pozi

ce

Sled

ujem

e: z

rych

lené

dých

ání,

přek

rven

ížab

er, křečo

vité

pohy

by,

ztrá

ta s

tabi

lity,

nek

lid a

zry

chle

népo

hyby

, úhy

n (ih

ned

odst

rani

t z

nádo

by),

pH,

tepl

ota,

02

Na

konc

i tes

tu: s

tano

vení

14 d

LC

50, N

OE

C, L

OE

C

Test

y ch

roni

cké

toxi

city

(dob

a trv

ání t

estu

3 měs

íce)

. -n

ejča

stěj

i pst

ruh

duho

vý n

ebo

kapr

obe

cný

-dlo

uhod

obé

účin

ky te

stov

anýc

h lá

tek

a př

ípra

vků

Sle

dova

né p

aram

etry

: cho

vání

ryb,

příj

em p

otra

vy,

délk

ové

a hm

otno

stní

přírůs

tky,

he

mat

olog

ické

a b

ioch

emic

ké u

kaza

tele

, ku

mul

ace

test

ovan

é lá

tky

v ry

bách

apo

d..

Nár

očné

pro

vede

ní

Vyš

ší v

ypov

ídac

í sch

opno

st je

ve

srov

nání

s te

sty

akut

ní to

xici

ty

Pro

látk

y, u

kte

rých

se

před

pokl

ádá

cíle

ná a

plik

ace

do v

odní

ho

pros

tředí

, neb

o ex

istu

je p

oten

ciál

ní n

ebez

pečí

, že

jimi b

ude

vodn

í pr

ostře

dí k

onta

min

ován

o.

Test

chr

onic

kéto

xici

ty n

ary

bách

Dru

hy: Poeciliareticulata

(pav

íočk

o), Brachydaniorerio

(zebřička

pruh

ovan

á), Cyprinuscarpio

(kap

robe

cný)

a Oncorhynchusmykiss

(pst

ruh

duho

vý)

Test

ován

íse

prov

ádíp

odle

směr

nic

OE

CD

.

Em

bryo

náln

í a e

mbr

yola

rvál

níte

sty

toxi

city

na

rybá

chC

íl: P

osou

dit v

liv te

stov

ané

látk

y na

raná

vývo

jová

stad

ia ry

b,

Prin

cip:

Exp

ozic

e op

lodněn

ých

jiker

v p

růtočn

ém n

ebo

sem

ista

tické

msy

stém

u

ISO

128

90:1

999

Det

erm

inat

ion

ofto

xici

ty b

y em

bryo

-larv

alst

age

offre

shw

ater

fish.

OE

CD

č. 2

10: E

mbr

yola

rvál

níte

st to

xici

ty n

a ry

bách

–vý

sled

kem

je s

tano

vení

nejn

ižší

účin

néko

ncen

trace

(LO

EC

) a k

once

ntra

ce, k

terá

nezpůs

obuj

e po

škoz

enír

yb (N

OE

C).

OE

CD

č. 2

12: E

mbr

yoná

lnít

est t

oxic

ity n

a ry

bách

–vý

sled

kem

je s

tano

vení

nejn

ižší

účin

néko

ncen

trace

(LO

EC

) a k

once

ntra

ce, k

terá

nezpůs

obuj

e po

škoz

enír

yb (N

OE

C).

Embr

yoná

lní t

est n

a jik

rách

a p

lůdk

u–

6-7

dní e

xpoz

ice,

čis

tě e

mbr

yoná

lní s

tadi

um-1

1 dr

uhů,

nejča

stěj

i dan

io, p

stru

h, k

apr,

hala

nčík

-uko

nčen

í tes

tu tě

sně

před

tím

než

doj

de k

úpl

né a

bsor

pci ž

lout

kové

ho v

áčku

v

kont

role

Embr

yola

rvál

níte

st–

test

na

raný

ch v

ývoj

ovýc

h st

adiíc

h ry

b –

31 d

ní e

xpoz

ice

-nejča

stěj

i kap

r obe

cný

a pa

k da

lšíc

h 16

dru

hů

-krm

ení Artemiasalina

-100

ks

na n

ádob

u

Sle

dova

né p

aram

etry

:líh

nutí

a př

ežív

ání e

mbr

yí, v

zhle

d váčk

ovité

ho p

lůdk

u,

rozd

íly v

cho

vání

, poh

ybliv

ost,

na k

onci

test

u ve

likos

t -dé

lka

a hm

otno

st,

anom

álie

ve

vývi

nuT,

pH

, O2,

konc

entra

ce lá

tky

v te

stu

Výs

ledk

y:LO

EC

, NO

EC

, vliv

látk

y na

líhn

ivos

ta d

obu

líhnu

tí, d

élko

hmot

nost

nírů

st, v

ýsky

t mor

folo

gick

ých

odch

ylek

Val

idita

test

u–

jako

u a

kutn

ího

+ líh

nutí

v ko

ntro

le pře

s 80

%, pře

žití

v ko

ntro

le pře

s 75

%

Test

ovl

ivně

ní rů

stu

na n

edos

pělý

ch ry

bách

OE

CD

č. 2

15 F

ish

juve

nile

grow

thte

st (2

000)

Cíl:

pos

ouze

ní úči

nků

dlou

hodo

bé e

xpoz

ice

chem

ický

mi l

átka

mi n

a rů

st

nedo

spěl

ých

ryb

Dru

hy: d

opor

učov

án n

edos

pělý

pst

ruh

duho

vý (O

ncor

hync

hus

myk

iss)

, m

ožno

i Brachydaniorerio

(dan

iopr

uhov

aný)

, Oryziaslatipes

(hal

ančí

kja

pons

ký)

Prů

točn

é ne

bo s

emis

tatic

kéus

pořá

dání

28 d

ní e

xpoz

ice

Vys

tave

ní ry

b su

blet

ální

mko

ncen

trací

mS

ledo

vané

par

amet

ry: přír

uste

kry

b v

jedn

otliv

ých

nádr

žích

T, p

H, O

2, ko

ncen

trace

látk

y v

test

u

Výs

lede

k: L

OE

C, N

OE

C,

EC

X =

kon

cent

race

, kte

rá v

yvol

á X

% z

měn

u rů

stu

Met

oda

pro

stan

oven

í bio

akum

ulac

e–

průt

okov

á zk

oušk

a na

rybá

ch•

OE

CD

č. 3

05: B

ioac

cum

ulat

ion

flow

-thro

ugh

fish

test

(OE

CD

199

6b)

Dvě

fáze

: •

Fáze

příj

mu

-28

dní (

až 6

0 dnů

k do

saže

ní ro

vnov

ážné

ho s

tavu

)•

Fáze

vyl

učov

ání

•P

očet

ryb

-pro

kaž

dý o

dběr

4 ry

by (m

in. 5

odběrů

běhe

m příj

mu,

4

odbě

ry běh

em v

yluč

ován

í)

•B

ioak

umul

ační

fakt

or B

CF

= ry

chlo

st příj

mu/

rych

lost

vyl

učov

ání =

ko

ncen

trace

test

ovan

é lá

tky

v ry

bách

/kon

cent

race

látk

y v

okol

ním

med

iu

•-v

ztaž

en k

cel

kové

hm

otno

sti a

k o

bsah

u tu

ku•

Val

idita

: mor

talit

a m

enší

než

10%

Test

y to

xici

ty n

a ry

bách

VA

LID

ITA

Výs

ledk

y se

pov

ažuj

íza

plat

né-s

práv

né, j

sou-

li sp

lněn

a ná

sled

ujíc

íkrit

eria

:

Kon

cent

race

rozp

uště

ného

kys

líku

nekl

esla

pod

60%

na

syce

ní

Kon

cent

race

test

ovan

élá

tky

nekl

esla

pod

80%

Mor

talit

a ko

ntro

lníh

o vz

orku

nepře

sáhl

a 10

%

Tepl

ota

byla

po

celo

u do

bu te

stu

v ro

zmez

ísta

nove

ném

pr

o da

ný d

ruh

ryb

Zjiš

těná

konc

entra

ce L

C 5

0 je

v s

oula

du s

e st

anda

rdy

Test

y to

xici

ty n

a ry

bách

Pro

toko

l•

Úda

je o

látc

e -v

last

nost

i•

Úda

je o

org

anis

mec

h –

druh

, km

en, v

elik

ost,

stář

í dod

avat

el, o

šetře

ní•

Test

ovac

í pos

tup

–ae

race

, pH

, T, o

bjem

, ryb

í ob

sádk

a, k

once

ntra

ce, p

očet

ryb

na k

once

ntra

ci,

poče

t opa

ková

ní

•V

yhod

noce

ní –

výsl

edky

, LC

50 a

kon

fidenčn

íin

terv

aly,

gra

fy, L

OE

C a

NO

EC

, zho

dnoc

ení

všec

h sl

edov

anýc

h pa

ram

etrů