Imunofenotypizace lymfatických Imunofenotypizace lymfatických uzlinuzlin
D. Starostka, M. Bílý, K. Klaricová, I. Ondrová,, M. Wróbel, L. Novosadová
Oddělení klinické hematologieNemocnice s poliklinikou Havířov
Možnosti laboratorního zpracování Možnosti laboratorního zpracování lymfatických uzlinlymfatických uzlin
• Cytomorfologie• Cytochemie a imunocytochemie• Histologie
• Imunohistochemie
• Imunofenotypisace buněčných suspensí
• Cytogenetika• Molekulární biologie• Mikrobiologie
Postup zpracování lymfatické uzlinyPostup zpracování lymfatické uzliny• Transport vzorku z operačního sálu v gáze zvlhčené pufrem
PBS• Zhotovení otisku na sklíčko k cytologickému vyšetření• Rozstříhání vzorku na drobné části do malého množství PBS• Mechanická desintegrace • Filtrace• Stanovení buněčnosti suspense na hematologickém
analyzátoru• Měření na průtokovém cytometru
Cíle imunofenotypizaceCíle imunofenotypizace
• Hematopoetické buňky (CD45+), nebo CD45- elementy
• Zastoupení jednotlivých lymfoidních linií
• Přítomnost monoklonality
• Charakteristický imunofenotyp
Panel pro imunofenotypizaci Panel pro imunofenotypizaci lymfoproliferací na OKH NsP Havířovlymfoproliferací na OKH NsP Havířov
• Panleukocytární marker : CD45
• T – markery : CD 3, CD 4, CD 8, CD 5, CD 7, CD 2, CD 1 , TCR
• B – markery : CD 19, CD 20, CD 21, CD 22, CD 23, CD 25, CD 38, CD 11c, CD 79b, FMC 7, CD 40, CD 28, CD 103, CD 138
• NK – markery: CD 16, CD 56
• Povrchové, event. intracytoplazmatické imunoglobuliny :
těžké řetězce IgG, IgM, IgA, IgD lehké řetězce kappa a lambda
Imunofenotyp u chronických B - lymfoproliferacíImunofenotyp u chronických B - lymfoproliferací
JednotkaMembrán. znakSmlg -/+ ++ +/++ +/++ - +/- ++ ++ ++ +/++ +/++Pan - B (CD19, CD20) ++ ++ ++ ++ - + ++ ++ ++ ++ ++CD5 ++ -/+ - - - +/- ++ -/+ - -/+ -/+CD22 -/+ ++ ++ ++ - + +/- +/++ +/- +/- ++CD23 ++ -/+ - - - ND -/+ -/+ +/- - -/+CD25 -/+ -/+ ++ - - +/- -/+ -/+ - -/+ -/+CD11c -/+ -/+ ++ ND ND ND - - +/- -/+ +CD10 - -/+ -/+ ND ND +/- -/+ +/- - - -/+FMC7 -/+ ++ ++ ++ - + +/- + + +/- ++CD79b - ++ + + - ND +/++ +/++ ND ND +/++CD103 - - ++ + - ND - - - - -/+CD43 + + + ND ND ND + - -/+ +/- +CD38 -/+ - -/+ ND ++ + - - ND + +/-HC2 - - ++ - - ND - - - - -/+
SLVLPCL WMLEUKÉMIE LYMFOMY
B-CLL B-PLL HCL HCL-V MCL FL MZL LPL
Úskalí přípravy a měření vzorků Úskalí přípravy a měření vzorků a interpretace výsledkůa interpretace výsledků
• Odběr uzliny• Konsistence uzliny• Způsob desintegrace • Potenciální nereprezentativnost vyšetřované populace• Způsob lýzy erytrocytů• Gateování
Problém: gateProblém: gate
Diagnostický souhrn 1.Diagnostický souhrn 1.Iniciály, pohlaví, věk
FCM Histologie Cytologie Konečná dg.
O.K., ž, 46 B-NHL, v.s. FL (CD10+)
FL, grade I NHL, v.s. FL FL
P.Š, m, 44 B-NHL, v.s. FL (CD10+)
FL, grade I NHL, v.s. FL FL
J.M., ž, 43 B-NHL, v.s. LPL Extramedulární nediferencovaný plasmocytom uzliny
NHL, v.s. LPL
LPL
J.P., m, 72 B-NHL, FL ?? (CD10 u 30% bb.)
DLBCL se značnou příměsí T-lymfocytů
NHL DLBCL
E.S., m, 51 T-lymfocytární predominance (80%), oj. neklonál. B-lymfocyty
T-cell rich DLBCL Nejasný nález
T-cell rich DLBCL
V.S., m, 68 B-NHL, v.s. FL FL, grade I NHL (FL ?, MZL ?)
FL
O.K., ž, 48 B-NHL, v.s. FL (CD10+)
FL, grade I NHL, v.s. FL FL
A.H., ž, 75 B-NHL, v.s. LPL B-NHL - LPL NHL, v.s. LPL
LPL
J.L., m, 55 B-NHL, DLCL ?, FL ? DLBCL DLCL DLBCLL.K., m, 64 B-CLL, Matutes 3/5 B-CLL, prolymfocytární a
paraimunoblastická transformace
Richterova transformace B-CLL
Richterova transformace B-CLL
Diagnostický souhrn 2.Diagnostický souhrn 2.
Iniciály, pohlaví,
věkFCM Histologie Cytologie Konečná dg.
M.Z., m, 56 V.s.monoklonální B-populace, nejednoznačný nález
Dif.dg. reaktivní hyperplasie vs. centroblastický B-NHL
DLCL Nejasný stav, t.č. monoklon. lymfocytóza nejist. významu
G.H., ž, 26 T-lymfocytární predominance (CD4:CD8 = 2.1:1)
Hodgkinův lymfom, NS Hodgkinův lymfom
Hodgkinův lymfom
V.B., ž, 33 T-lymfocytární predominance (CD4:CD8 = 4.5:1)
Hodgkinův lymfom, NS Hodgkinův lymfom
Hodgkinův lymfom
L.K., m, 70 T-lymfocytární predominance(CD4:CD8 = 1.1:1)
Hodgkinův lymfom, LP Hodgkinův lymfom
Hodgkinův lymfom
D.B., ž, 25 T-lymfocytární predominance (CD4:CD8 = 9:1)
Hodgkinův lymfom, NS Hodgkinův lymfom
Hodgkinův lymfom
Diagnostický souhrn 3.Diagnostický souhrn 3.
Iniciály, pohlaví,
věkFCM Histologie Cytologie Konečná dg.
F.T., m, 56 T-lymfocytární predominance (CD4:CD8 = 7:1)
Reaktivní změny Reaktivní lymfadenitida
Reaktivní lymfadenitida
M.M., ž, 15 T-lymfocytární predominance (CD4:CD8 = 3:1)
Sarkoidosa Reaktivní lymfadenitida
Sarkoidosa
K.S., ž, 75 Pouze 4% CD45+ buněk
Metastasa malobuněčného karcinomu
Metastasa karcinomu
Metastasa karcinomu
L.L., m, 68 T-lymfocytární predominance(CD4:CD8 = 1.8:1)
Metastasa nízce diferencovaného karcinomu
Metastasa karcinomu
Metastasa karcinomu
Z.F., m, 58 Pouze 7% CD45+ buněk
Metastasa karcinomu
Metastasa karcinomu
Metastasa karcinomu
Kasuistiky – klinická dataKasuistiky – klinická data
• Kasuistika č. 1: Pacientka O.K., 46 let. Multilokulární lymfadenomegalie s predilekční
intraabdominální masou. Leukocytosa (35 x 109/l) s absolutní lymfocytosou (0.70 numfr.).
• Kasuistika č. 2: Pacientka J.M., 43 let. Sjögrenův syndrom. Během hospitalisace pro
bronchopneumonii zjištěna isolovaná cervikální lymfadenomegalie. Sérový paraprotein IgM.
• Kasuistika č. 3: Pacient L.K., 64 let. B-CLL s malým klonem v periferní krvi
(leukopenie), nodulární typ postižení KD. Po půlročním sledování masivní rychle narůstající cervikální lymfadenomegalie („býčí šíje“). Klinické podezření na histologickou transformaci B-CLL v high-grade lymfoproliferaci.
Kasuistika č. 1 - cytologický nálezKasuistika č. 1 - cytologický nález
Kasuistika č. 1 - imunofenotypisace lymfatické Kasuistika č. 1 - imunofenotypisace lymfatické uzlinyuzliny
Kasuistika č. 1 - rozdíly v imunotypu lymfomových buněk uzliny, KD Kasuistika č. 1 - rozdíly v imunotypu lymfomových buněk uzliny, KD a PKa PK
Lymfatická uzlinaLymfatická uzlina
Kostní dřeňKostní dřeň
Periferní krevPeriferní krev
48,0 48,0 %%
23,4 23,4 %%
6,0 %6,0 %
Kasuistika č. 2 - cytologický nálezKasuistika č. 2 - cytologický nález
Kasuistika č. 2 - imunofenotypisace lymfatické Kasuistika č. 2 - imunofenotypisace lymfatické uzlinyuzliny
Kasuistika č. 3 - cytologický nálezKasuistika č. 3 - cytologický nález
Kasuistika č. 3 - imunofenotypisace lymfatické Kasuistika č. 3 - imunofenotypisace lymfatické uzlinyuzliny
ZávěryZávěry
• Rychlá, citlivá a v mnoha případech diagnostická metoda umožňující v závažných případech bezprostřední léčbu
• Spojení s cytologií otiskového preparátu zvyšuje diagnostickou výtěžnost
• Odlišení uzlin postižených lymfoproliferacemi od metastatických uzlin (negativita CD45 na metastatických buňkách)
• Přesná specifikace B- non-hodgkinských lymfomů (B-NHL) podle charakteristického imunofenotypu
• U non-hodgkinských lymfomů (NHL) vysoký stupeň souladu mezi histologickou diagnózou a typizačním nálezem
• U Hodgkinova lymfomu vyšetření problematické
