Enterotoxiny Staphylococcus aureus

Jana Kotschwarová Andrea Koťová

Obsah

• Charakteristika Staphylococcus aureus

• Vlastnosti

• Faktory virulence

• Enterotoxiny

• Patogeneze

• Výskyt

• Metody stanovení

• Prevence výskytu

Charakteristika Staphylococcus aureus

• „Zlatý stafylokok“

• nejvýznamnější druh rodu Staphylococcus (čeleď Staphylococcaceae)

• velikost 0,7 – 0,9 µm, tvoří hroznovité shluky

• G+ kok, fakultativně anaerobní, nepohyblivý

• zkvašuje manitol

Vlastnosti • tvoří exopolysacharidy – slizy

• tvoří biofilm pomocí adhezinu

• na krevním agaru může způsobovat úplnou hemolýzu

• MRSA (methicillin-rezistentní S. aureus)- kmeny rezistentní vůči atb. oxacilinu

Podmínky Růst bakterií

Produkce enterotoxinu (optimum/rozmezí)

Teplota [°C] 7-48 35-40 10-48

pH 4,3-9 7-8 4,5-9,6

aw 0,83-0,99 0,98 0,87-0,99

Faktory virulence • produkce velkého množství biologicky aktivních látek

a. Adhezivní faktory

b. Propagační a transportní faktory- α hemolyzin

c. Ochranné faktory a toxiny

Enterotoxiny

• toxické exoproteiny chránící koky

• bohaté na Lys, Asp, Glu a Tyr

• metabolické produkty při množení S. aureus

• vyvolávají alimentární onemocnění

• 20 typů enterotoxinů SEA – SEU (značení genů)

• SEA-SEE způsobuje alimentární intoxikaci

• odolávají varu 20 min

Patogeneze

• přirozeně se vyskytuje na kůži a oblasti nosohltanu lidí a zvířat

• při oslabení organismu- kožní záněty, alimentární onemocnění, pneumonie, osteomyelitidy, STS, syndrom opařené kůže, abscesy, bakteriální endokarditidy a sepse

Stafylokoková enterotoxikóza

• infekční dávka S. aureus min. 105 KTJ.g-1 a koncentrace toxinu v potravině 1 ng.g-1

• příznaky se objeví za 1-6 h po konzumaci

• příznaky: nevolnost, zvracení, bolest břicha, průjem (bez horečky) a bolest hlavy

• odeznění za 24 h

• mnoho případů stafylokokové enterotoxikózy nezaznamenáno pro rychlý průběh

Výskyt

• přirozeně osidluje pokožku a sliznice, běžná mikroflóra vemene

• kontaminace ze zvířat, prostředí, nebo lidí během výrobního procesu

• mléčné výrobky, lahůdky (šunka….), pudinky a salátové dresinky

• u výrobků s velkým podílem ruční práce

Metody stanovení enterotoxinů

• Přímé metody

imunologické metody

fyzikálně-chemické metody

• Nepřímé metody

molekulárně biologické metody

Imunologické metody

ELISA • vazba antigenu a protilátky značené enzymem, který

štěpením substrátu vyvolá barevnou změnu • nejčastěji se využívá tzv. sandwich ELISA, kdy jsou na

detekovaný antigen navázány 2 protilátky- imobilizovaná a enzymaticky značená

ELFA • princip je podobný jako u metody ELISA, rozdíl je

v použitém substrátu, který je enzymem štěpen na fluorescenční produkt

• vzniklé chemické změny jsou detekovány pomocí fotodiodového fluorimetru

RPLA = reverzní pasivní latexová aglutinace • aglutinační reakce • založena na vysoce specifické vazebné reakci mezi

antigenem a protilátkou, nosičem je barevná latexová částice

• provádí se v mikrotitračních destičkách

• hodnocení je semikvantitativní- podle mřížkové struktury vzniklé na dně jamek

Fyzikálně chemické metody

SDS- PAGE • separace proteinů dle jejich pohyblivosti (v závislosti na

délce řetězce) v elektrickém poli • polyakrylamidový gel s SDS

LC-MS • přesné stanovení proteinu na základě jeho molekulové

hmotnosti a na základě pořadí AK po enzymatickém štěpení

• nedostupnost std. pro celé spektrum SEs

HPLC • časově náročná příprava vzorků- složité extrakční postupy

a následné čištění extraktů • pomocí kolony se stacionární fází separujeme jednotlivé

toxiny • ověření identity toxinu imunologickou metodou • nejsou dostupné standardy pro všechny SEs, zatím

stanoveno jen SEA a SEB

Molekulárně biologické metody

PCR

• denaturace DNA- rozvolnění vlákna

• hybridizace- nasednutí primerů

• syntéza- vznik nových vláken působením enzymu DNA- polymerázy

Prevence výskytu

• důsledná hygiena pracovníků a používání ochranných rukavic v potravinářském provozu

• zabránění množení bakterie a následné produkci toxinu- pasterace

• nenechávat potraviny dlouhodobě při pokojové teplotě

Zdroje

• http://cit.vfu.cz/alimentarni-onemocneni/sa/index.html

• http://www.chemicke-listy.cz/docs/full/2012_08_745-749.pdf

• http://www.wikiskripta.eu/index.php/Enterotoxiny

• http://www.wikiskripta.eu/index.php/Rod_Staphylococcus#Staphylococcus_aureus