GenomikaGenomikaSeminář pro maturanty z biologieSeminář pro maturanty z biologie

20072007

Ilustrace k článku Francise Collinse z roku 2003, kdy byla dokončena kompletní sekvence lidského genomu (VIZ i následující obr.)

Genové inženýrstvíGenové inženýrstvíužitečné termínyužitečné termíny

Rekombinantní DNARekombinantní DNA = DNA, ve které se nachází = DNA, ve které se nachází geny nejméně ze dvou zdrojů, často ze dvou geny nejméně ze dvou zdrojů, často ze dvou různých druhů organismůrůzných druhů organismů

BiotechnologieBiotechnologie = manipulace s organismy nebo = manipulace s organismy nebo jejich součástmi za vzniku užitečného produktujejich součástmi za vzniku užitečného produktu

PlasmidPlasmid = malá kruhová DNA, nacházející se v = malá kruhová DNA, nacházející se v bakteriích. Plasmid není součástí bakteriálního bakteriích. Plasmid není součástí bakteriálního chromosomuchromosomu

VektorVektor = molekula DNA, která je schopna = molekula DNA, která je schopna dopravit cizí DNA do buňky a replikovat ji zde. dopravit cizí DNA do buňky a replikovat ji zde. Vektorem může být plasmidVektorem může být plasmid

Klonování DNAKlonování DNA

Klonování DNAKlonování DNA

1.1. Isolace plasmidu z baktérie a isolace genu, Isolace plasmidu z baktérie a isolace genu, který nás zajímá z genomu člověkakterý nás zajímá z genomu člověka

2.2. Vložení genu do plasmiduVložení genu do plasmidu

3.3. Vrácení plasmidu do bakterieVrácení plasmidu do bakterie

4.4. Z každým rozdělením bakterie dojde rovněž k Z každým rozdělením bakterie dojde rovněž k replikaci plasmidu a tím i genureplikaci plasmidu a tím i genu

Využití: buď za účelem genového produktu Využití: buď za účelem genového produktu (insulin, růstový hormon), nebo za účelem (insulin, růstový hormon), nebo za účelem namnožení samotného genunamnožení samotného genu

Restrikční enzymyRestrikční enzymy

V přírodě tyto enzymy chrání bakterie proti V přírodě tyto enzymy chrání bakterie proti cizorodé DNA, pronikající do buňky, typicky proti cizorodé DNA, pronikající do buňky, typicky proti virové DNAvirové DNA

Umí štěpit DNA, = provádět její restrikciUmí štěpit DNA, = provádět její restrikci Štěpí DNA na určitých, specifických místech, o Štěpí DNA na určitých, specifických místech, o

délce obvykle 4 – 8 nukleotidů, často délce obvykle 4 – 8 nukleotidů, často symetrických, např. GAATTC (= enzym EcoR1). symetrických, např. GAATTC (= enzym EcoR1). Protože se toto místo nachází náhodně na Protože se toto místo nachází náhodně na mnoha místech cizí DNA, proběhne v nich mnoha místech cizí DNA, proběhne v nich štěpeníštěpení

Vlastní bakteriální DNA je na restrikčních Vlastní bakteriální DNA je na restrikčních místech chráněna proti štěpení přidáním místech chráněna proti štěpení přidáním metylové skupiny na adeniny a cytosinymetylové skupiny na adeniny a cytosiny

Restrikční enzymyRestrikční enzymy

V přírodě restriktázy umí štěpit „nepřátelskou“ DNA bakteriofágů

Restrikční endonukleázyRestrikční endonukleázy

EcoR1

Restrikční enzymyRestrikční enzymy

Protože dochází ke štěpení pouze v Protože dochází ke štěpení pouze v konkrétních restrikčních místech, i mnoho konkrétních restrikčních místech, i mnoho kopií stejné DNA poskytne tytéž kopií stejné DNA poskytne tytéž restrikční restrikční fragmentyfragmenty

Restrikční fragmenty jsou štěpeny tak, že Restrikční fragmenty jsou štěpeny tak, že vzniknou tzv. kohezní konce (sticky ends) vzniknou tzv. kohezní konce (sticky ends) (VIZ další obrázek)(VIZ další obrázek)

Restrikční enzymyRestrikční enzymy

Kohezní konce (sticky ends)

Kohezní konce budou tvořit vodíkové vazby s jinými restrikčními fragmenty, vzniklými působením téhož restrikčního enzymu

Enzym DNA ligáza (nám známý z kapitoly o replikaci DNA) vytvoří fosfodiesterové kovalentní vazby

Klonování genů Klonování genů do plasmidůdo plasmidů

Klonování eukaryotického genu do Klonování eukaryotického genu do bakteriálního plasmidubakteriálního plasmidu

1.1. Isolace vektoru a genu, o který máme zájemIsolace vektoru a genu, o který máme zájem V našem případě pochází plasmid z E. coli a V našem případě pochází plasmid z E. coli a

obsahujeobsahuje Gen Gen ampampRR zajišťující resistenci proti antibiotiku zajišťující resistenci proti antibiotiku

ampicilínuampicilínu Gen Gen lacZlacZ, kódující enzym , kódující enzym ββ-galaktozidázu, která -galaktozidázu, která

katalyzuje štěpení cukru laktózykatalyzuje štěpení cukru laktózy Jediné restrikční místo dané restriktázy, které se Jediné restrikční místo dané restriktázy, které se

nachází uvnitř genu nachází uvnitř genu lacZlacZ

Klonování eukaryotického genu do Klonování eukaryotického genu do bakteriálního plasmidubakteriálního plasmidu

2. Inserce DNA do vektoru2. Inserce DNA do vektoru Plasmid i lidskou DNA Plasmid i lidskou DNA

naštěpíme naštěpíme restriktázou: enzym restriktázou: enzym rozštěpí plasmid na rozštěpí plasmid na jediném místě – v jediném místě – v lacZlacZ genu a lidskou genu a lidskou DNA na mnoha DNA na mnoha tisících místech. tisících místech. Jeden restrikční Jeden restrikční fragment z nich bude fragment z nich bude obsahovat i náš genobsahovat i náš gen

Klonování eukaryotického genu do Klonování eukaryotického genu do bakteriálního plasmidubakteriálního plasmidu

22. Inserce DNA do vektoru. Inserce DNA do vektoru Vznikne pochopitelně Vznikne pochopitelně

mnoho útvarů: dva mnoho útvarů: dva plasmidy slepené k plasmidy slepené k sobě, plasmid s sobě, plasmid s několika kusy DNA, několika kusy DNA, re-formovaný plasmid re-formovaný plasmid atd.atd.

Díky náhodě ale Díky náhodě ale vznikne i plasmid vznikne i plasmid obsahující gen obsahující gen našeho zájmu, jak našeho zájmu, jak ukazuje obrázekukazuje obrázek

Klonování eukaryotického genu do Klonování eukaryotického genu do bakteriálního plasmidubakteriálního plasmidu

3. Vrácení vektoru do bakterie3. Vrácení vektoru do bakterie Tzv. transformací (zisk nahé DNA z okolního Tzv. transformací (zisk nahé DNA z okolního

prostředí) se plasmidy vrátí do bakterieprostředí) se plasmidy vrátí do bakterie Tyto bakterie jsou předem upraveny tak, že Tyto bakterie jsou předem upraveny tak, že

mají lacZmají lacZ-- mutaci = neumí hydrolyzovat mutaci = neumí hydrolyzovat laktózulaktózu

Klonování eukaryotického genu do Klonování eukaryotického genu do bakteriálního plasmidubakteriálního plasmidu

4. Klonování bakteriálních buněk (…a 4. Klonování bakteriálních buněk (…a plasmidů v nich)plasmidů v nich) Bakterie jsou vloženy na živné médium Bakterie jsou vloženy na živné médium

obsahující ampicilin a cukr zvaný X-gal.obsahující ampicilin a cukr zvaný X-gal. Každá reprodukující Každá reprodukující

se bakterie nakonec se bakterie nakonec vytvoří kolonii vytvoří kolonii viditelnou pouhým viditelnou pouhým okemokem

Klonování eukaryotického genu do Klonování eukaryotického genu do bakteriálního plasmidubakteriálního plasmidu

4. Klonování bakteriálních buněk (…a 4. Klonování bakteriálních buněk (…a plasmidů v nich)plasmidů v nich) Vyrostlé kolonie budou určitě obsahovat Vyrostlé kolonie budou určitě obsahovat

plasmid, neboť v médiu je antibiotikum plasmid, neboť v médiu je antibiotikum ampicilin, které ostatné bakterie zahubíampicilin, které ostatné bakterie zahubí

Cukr X-gal je hydrolyzován Cukr X-gal je hydrolyzován ββ-galaktosidázou -galaktosidázou za vzniku modře zbarvených bakteriálních za vzniku modře zbarvených bakteriálních koloniíkolonií

Pokud ale baktérie nemá funkční gen Pokud ale baktérie nemá funkční gen lacZlacZ, , kolonie budou bíle zbarvené – ty nás zajímajíkolonie budou bíle zbarvené – ty nás zajímají

Klonování eukaryotického genu do Klonování eukaryotického genu do bakteriálního plasmidubakteriálního plasmidu

4. Klonování bakteriálních buněk (…a 4. Klonování bakteriálních buněk (…a plasmidů v nich)plasmidů v nich) Tímto způsobem ovšem získáme kolonie Tímto způsobem ovšem získáme kolonie

bakterií, obsahujících mnoho a mnoho bakterií, obsahujících mnoho a mnoho různých fragmentů lidské DNA, nejen ten, o různých fragmentů lidské DNA, nejen ten, o který nám jdekterý nám jde

Následuje nejtěžší krok: rozeznat kolonii Následuje nejtěžší krok: rozeznat kolonii bakterií, která obsahuje v plasmidu gen bakterií, která obsahuje v plasmidu gen našeho zájmunašeho zájmu

Klonování eukaryotického genu do Klonování eukaryotického genu do bakteriálního plasmidubakteriálního plasmidu

5. Identifikace klonu nesoucí gen našeho 5. Identifikace klonu nesoucí gen našeho zájmuzájmu Můžeme hledat buď gen sám nebo jeho Můžeme hledat buď gen sám nebo jeho

proteinový produktproteinový produkt Pokud víme, jakou sekvenci gen obsahuje, Pokud víme, jakou sekvenci gen obsahuje,

použijeme metodu hybridizování nukleových použijeme metodu hybridizování nukleových kyselin (nucleic acid hybridization)…kyselin (nucleic acid hybridization)…

……za užití krátké jednovláknové DNA, která je za užití krátké jednovláknové DNA, která je komplementární ke známé sekvenci genu. komplementární ke známé sekvenci genu. Tato DNA se nazývá nucleic acid probe, Tato DNA se nazývá nucleic acid probe, česky poněkud slangově zvaná „próba“česky poněkud slangově zvaná „próba“

Klonování genů Klonování genů do plasmidůdo plasmidů

Klonování eukaryotického genu do Klonování eukaryotického genu do bakteriálního plasmidubakteriálního plasmidu

5. Identifikace klonu nesoucí gen našeho 5. Identifikace klonu nesoucí gen našeho zájmuzájmu Próbu označíme radioaktivním isotopem nebo Próbu označíme radioaktivním isotopem nebo

fluorescenčním barvivemfluorescenčním barvivem

Identifikace Identifikace klonovaného genuklonovaného genu

Důležitým krokem je denaturace bakteriální DNA.Provádí se buď teplem, nebo chemicky.Při následné renaturaci se próba naváže ke hledanému genu, je-li přítomen

Klonování eukaryotického genu do Klonování eukaryotického genu do bakteriálního plasmidubakteriálního plasmidu

5. Identifikace klonu nesoucí gen našeho 5. Identifikace klonu nesoucí gen našeho zájmuzájmu Pokud buňky překládají hledaný gen do Pokud buňky překládají hledaný gen do

proteinu, můžeme detekovat přímo proteinproteinu, můžeme detekovat přímo protein A to buď specifickými protilátkamiA to buď specifickými protilátkami Nebo za pomoci jeho enzymatické aktivityNebo za pomoci jeho enzymatické aktivity

Klonování a exprese Klonování a exprese eukaryotických genůeukaryotických genů

Klonovaným genům chybí bakteriální Klonovaným genům chybí bakteriální promotorpromotor

Bakteriální geny nemají introny – a Bakteriální geny nemají introny – a bakterie tedy postrádají aparát schopný bakterie tedy postrádají aparát schopný sestřihu. Tomuto problému čelíme sestřihu. Tomuto problému čelíme vytvořením tzv. cDNAvytvořením tzv. cDNA

Mnoho eukaryotických proteinů funguje až Mnoho eukaryotických proteinů funguje až po posttranslačních úpravách – přidání po posttranslačních úpravách – přidání sacharidové složky atd.sacharidové složky atd.

cDNAcDNA

Nejprve potřebujeme získat z eukaryotické Nejprve potřebujeme získat z eukaryotické buňky již hotovou, sestřiženou mRNAbuňky již hotovou, sestřiženou mRNA

Tuto mRNA isolujeme a za pomocí Tuto mRNA isolujeme a za pomocí reverzní transkriptázy vytvoříme reverzní transkriptázy vytvoříme komplementární vlákno DNA a v komplementární vlákno DNA a v následujcícím kole replikace následujcícím kole replikace dvoušroubovici DNAdvoušroubovici DNA

Tato DNA je zvána komplementární DNA, Tato DNA je zvána komplementární DNA, neboli cDNAneboli cDNA

cDNAcDNA

YACYAC

Problému prokaryotické-eukaryotické Problému prokaryotické-eukaryotické nekompatibility se můžeme zbavit užitím nekompatibility se můžeme zbavit užitím kvasinekkvasinek Kvasinky rostou stejně rychle jako bakterie Kvasinky rostou stejně rychle jako bakterie a mají plasmidy (což je u eukaryot vzácnost)a mají plasmidy (což je u eukaryot vzácnost)

YAC je dalším pokusem – jedná se o umělý YAC je dalším pokusem – jedná se o umělý kvasinkový chromosom (kvasinkový chromosom (YYeast east AArtificial rtificial CChromosome): má místa ori, centromeru a hromosome): má místa ori, centromeru a telomerytelomery Při mitóze se chová jako „divoký“ chromosomPři mitóze se chová jako „divoký“ chromosom Vejde se do ně mnohem více DNA než do plasmiduVejde se do ně mnohem více DNA než do plasmidu

Genové knihovnyGenové knihovnyKlonované geny mohou být uchovány v genových Klonované geny mohou být uchovány v genových

knihovnáchknihovnách

Genová knihovna = tisíce bakterií Genová knihovna = tisíce bakterií obsahující plasmid s jedním určitým obsahující plasmid s jedním určitým genemgenem

Krom plasmidových knihoven existují i Krom plasmidových knihoven existují i fágové knihovnyfágové knihovny

Genové knihovnyGenové knihovnyKlonované geny mohou být uchovány v genových Klonované geny mohou být uchovány v genových

knihovnáchknihovnách

PCRPCR

Polymerase chain Polymerase chain reactionreaction

PCRPCR

PCRPCR

Je technika, která umožňuje v krátkém Je technika, která umožňuje v krátkém času namnožit daný kus DNA bez pomoci času namnožit daný kus DNA bez pomoci buněkbuněk

užívá se, pokud je DNA velmi malé užívá se, pokud je DNA velmi malé množství nebo je DNA znečištěnamnožství nebo je DNA znečištěna

za několik hodin je schopna metoda PCR za několik hodin je schopna metoda PCR vyprodukovat kolem miliardy kopií DNAvyprodukovat kolem miliardy kopií DNA

PCRPCR Metoda PCR se sestává ze tří kroků, při kterých Metoda PCR se sestává ze tří kroků, při kterých

se množství DNA zvětšuje exponenciálněse množství DNA zvětšuje exponenciálně klíčovým enzymem je DNA-polymeráza z klíčovým enzymem je DNA-polymeráza z

Thermus aquaticusThermus aquaticus, žijícím v horkých , žijícím v horkých pramenech Yellowstonského národního parkupramenech Yellowstonského národního parku

tato polymeráza nese název Taq polymeráza, je tato polymeráza nese název Taq polymeráza, je odolná vůči vysokým teplotám a zůstává aktivní odolná vůči vysokým teplotám a zůstává aktivní přes mnoho cyklůpřes mnoho cyklů

PCRPCR

Krom vysoké rychlosti je na metodě PCR Krom vysoké rychlosti je na metodě PCR impozantní její selektivita. Známe-li impozantní její selektivita. Známe-li příslušné sekvence, PCR je schopna příslušné sekvence, PCR je schopna „vybrat“ z dlouhé molekuly DNA oblast, která „vybrat“ z dlouhé molekuly DNA oblast, která má být namnožena, například konkrétní genmá být namnožena, například konkrétní gen

objevil Kally Muris 1983. O 10 let později objevil Kally Muris 1983. O 10 let později obdržel Nobelovu cenu. Metoda se dnes obdržel Nobelovu cenu. Metoda se dnes běžně užívá v mnoha laboratoříchběžně užívá v mnoha laboratořích

PCRPCRPříklady úspěšného užití:Příklady úspěšného užití:

namnožení DNA z 40 000 let starého srstnatého namnožení DNA z 40 000 let starého srstnatého mamutamamuta

namnožení mtDNA neandrtálcenamnožení mtDNA neandrtálce namnožení nepatrného množství DNA z dějiště namnožení nepatrného množství DNA z dějiště

zločinu. Stačí malé množství krve, tkáně či spermatuzločinu. Stačí malé množství krve, tkáně či spermatu namnožení DNA z jednotlivých embryonálních namnožení DNA z jednotlivých embryonálních

buněk v rámci prenatální diagnostikybuněk v rámci prenatální diagnostiky namnožení virové DNA z buněk, ve kterých se dá namnožení virové DNA z buněk, ve kterých se dá

jinak jen těžko prokázat přítomnost viru, jako je HIVjinak jen těžko prokázat přítomnost viru, jako je HIV

PCRPCRPotřeby:Potřeby: DNA, která má být namnoženaDNA, která má být namnožena Taq polymerázaTaq polymeráza zásoba primerů, ohraničujících cílovou sekvenci. zásoba primerů, ohraničujících cílovou sekvenci. zásoba dATP, dCTP, dGTP, dTTPzásoba dATP, dCTP, dGTP, dTTP MgClMgCl22

PCRPCR

Prvním krokem je krátké zahřátí celé směsi na Prvním krokem je krátké zahřátí celé směsi na 9494ooC -96C -96ooC. Teplem se poruší vodíkové vazby C. Teplem se poruší vodíkové vazby a oba řetězce DNA se oddělía oba řetězce DNA se oddělí

PCRPCR

Druhým krokem je ochlazení směsi na Druhým krokem je ochlazení směsi na 5050ooC - 65C - 65ooC. Ochlazení umožní primerům C. Ochlazení umožní primerům se navázat na cílovou DNA vodíkovými se navázat na cílovou DNA vodíkovými můstky podle pravidel komplementaritymůstky podle pravidel komplementarity

PCRPCRPrimery jsou krátké, synteticky vyrobené molekuly Primery jsou krátké, synteticky vyrobené molekuly jednořetězcové DNA (20-30 nukleotidů), které jsou jednořetězcové DNA (20-30 nukleotidů), které jsou komplementární ke koncům DNA, která má být komplementární ke koncům DNA, která má být amplifikována. Primery tak determinují místo na DNA, amplifikována. Primery tak determinují místo na DNA, které má být zmnoženo (na obrázku označeno které má být zmnoženo (na obrázku označeno modřemodře))

PCRPCR

Třetí krok:Třetí krok:

DNA-polymeráza DNA-polymeráza nyní může přidávat nyní může přidávat nukleotidy k 3nukleotidy k 3´koncům primerů, ´koncům primerů, jako při obvyklé jako při obvyklé replikacireplikaci

Směs je zahřáta na Směs je zahřáta na 7272ooCC

PCRPCR

Směs je nyní znovu ohřáta a začíná nové Směs je nyní znovu ohřáta a začíná nové kolo cyklukolo cyklu

každé kolo trvá pouze asi 5 minut. každé kolo trvá pouze asi 5 minut. Výsledkem je dvojnásobné množství Výsledkem je dvojnásobné množství cílové DNA, dlouhé i stovky párů bázícílové DNA, dlouhé i stovky párů bází

tento tříkrokový cyklus je následně tento tříkrokový cyklus je následně opakován znovu a znovu. Za třicet cyklů je opakován znovu a znovu. Za třicet cyklů je možno teoreticky obdržet miliardu kopiímožno teoreticky obdržet miliardu kopií

PCRPCR

PCRPCR

Gelová elektroforézaGelová elektroforéza

Gelová elektroforéza je metoda, která odděluje Gelová elektroforéza je metoda, která odděluje jednotlivé fragmenty DNA na základě jejich jednotlivé fragmenty DNA na základě jejich pohybu gelem. Pohyb je způsoben elektrickým pohybu gelem. Pohyb je způsoben elektrickým polempolem

směr a rychlost pohybu je dán nábojem molekul, směr a rychlost pohybu je dán nábojem molekul, jejich velikostí a tvarem a rovněž velikostí náboje jejich velikostí a tvarem a rovněž velikostí náboje elektrického pole a složením geluelektrického pole a složením gelu

DNA je nabitá záporně, bude se tedy pohybovat DNA je nabitá záporně, bude se tedy pohybovat ke kladnému koncike kladnému konci

Gelová elektroforézaGelová elektroforéza

Gelová elektroforézaGelová elektroforéza

Gelová elektroforézaGelová elektroforéza

Analýza DNA a genomikaAnalýza DNA a genomika

GenomikaGenomika

Jak již jednou máme gen, který nás zajímá Jak již jednou máme gen, který nás zajímá v knihovně, je možno začít klást otázkyv knihovně, je možno začít klást otázky Liší se sekvence tohoto genu u lidí zdravých a Liší se sekvence tohoto genu u lidí zdravých a

nemocných nějakou konkrétní chorobou?nemocných nějakou konkrétní chorobou? Na kterém chromosomu se gen nachází a ve Na kterém chromosomu se gen nachází a ve

kterých buňkách a kdy je exprimován?kterých buňkách a kdy je exprimován? Liší se tento gen od genů jiných druhů, Liší se tento gen od genů jiných druhů,

vykonávající stejnou funkci? A jak mnoho?vykonávající stejnou funkci? A jak mnoho?

GenomikaGenomika

Nakonec chceme poznat Nakonec chceme poznat kompletní sekvenci tohoto genu a rozdíly v kompletní sekvenci tohoto genu a rozdíly v

sekvenci mezi zdravými a a nemocnýmisekvenci mezi zdravými a a nemocnými Přesné rozdíly mezi sekvencí tohoto genu a Přesné rozdíly mezi sekvencí tohoto genu a

genů jiných druhů organismůgenů jiných druhů organismů

Chceme rovněž poznat kompletní Chceme rovněž poznat kompletní sekvenci celého organismusekvenci celého organismu

Elektroforéza restrikčních Elektroforéza restrikčních fragmentůfragmentů

Elektroforéza restrikčních Elektroforéza restrikčních fragmentůfragmentů

Každou ze zkoumaných DNA, např. dvě Každou ze zkoumaných DNA, např. dvě alely téhož genu, natrávíme stejnou alely téhož genu, natrávíme stejnou restriktázourestriktázou

Pokud se sekvence písmen liší, budou se Pokud se sekvence písmen liší, budou se lišit i restrikční místa a tedy i počet a délka lišit i restrikční místa a tedy i počet a délka vzniklých fragmentůvzniklých fragmentů

Southernův přenosSouthernův přenos

Southernův přenosSouthernův přenosSouthern blottingSouthern blotting

Výhodou je, že začneme s DNA z celého Výhodou je, že začneme s DNA z celého genomu – vyhneme se tak zdlouhavému genomu – vyhneme se tak zdlouhavému vytváření knihovenvytváření knihoven

našem modelovém případě byla užita našem modelovém případě byla užita DNA tří jedincůDNA tří jedinců

Metoda určí nejen, zda je určitá DNA Metoda určí nejen, zda je určitá DNA sekvence přítomna v genomu, ale také v sekvence přítomna v genomu, ale také v kterém konkrétním fragmentukterém konkrétním fragmentu

RFLPRFLP

Southernův přenos umožňuje mapovat nejen Southernův přenos umožňuje mapovat nejen geny, ale i nekódující úseky DNAgeny, ale i nekódující úseky DNA

Zjistilo se, že v nekódujících úsecích DNA Zjistilo se, že v nekódujících úsecích DNA existuje značná variabilita mezi jedinci nebo existuje značná variabilita mezi jedinci nebo mezi jednotlivými homologickými chromosomymezi jednotlivými homologickými chromosomy

Tyto rozdíly dostaly název RFLP (Restriction Tyto rozdíly dostaly název RFLP (Restriction Fragment Lenght Polymorphism) – Fragment Lenght Polymorphism) – polymorfismus délky restrikčních fragmentůpolymorfismus délky restrikčních fragmentů

Jako výchozí materiál může být užit celý genomJako výchozí materiál může být užit celý genom

RFLPRFLP

Z minulého obrázku bylo patrné, že jedinci I a II Z minulého obrázku bylo patrné, že jedinci I a II jsou nositeli stejného markeru (=RFLP nebo jsou nositeli stejného markeru (=RFLP nebo genu) a že jedinec III je odlišnýgenu) a že jedinec III je odlišný

RFLP se dědí klasickou mendelovskou RFLP se dědí klasickou mendelovskou dědičnostídědičností

Protože RFLPs je po genomu rozeseto mnoho a Protože RFLPs je po genomu rozeseto mnoho a platí stejná pravidla jako při konstrukci genetické platí stejná pravidla jako při konstrukci genetické mapy (čím méně crossing-overů mezi RFLP a mapy (čím méně crossing-overů mezi RFLP a alelou, tím jsou si blíž), staly se RFLPs alelou, tím jsou si blíž), staly se RFLPs užitečnou pomůckou při konstrukci mapužitečnou pomůckou při konstrukci map