+ All Categories
Home > Documents > KOLORIMETRICKÝ TEST ASIMILACE CUKRŮ K IDENTIFIKACI … · 2012. 10. 3. · 3 Každý cukr je...

KOLORIMETRICKÝ TEST ASIMILACE CUKRŮ K IDENTIFIKACI … · 2012. 10. 3. · 3 Každý cukr je...

Date post: 18-Sep-2020
Category:
Upload: others
View: 3 times
Download: 0 times
Share this document with a friend
22
1 AUXACOLOR™ 2 56513 20 testů KOLORIMETRICKÝ TEST ASIMILACE CUKRŮ K IDENTIFIKACI HLAVNÍCH LÉKAŘSKY VÝZNAMNÝCH KVASINEK.
Transcript
Page 1: KOLORIMETRICKÝ TEST ASIMILACE CUKRŮ K IDENTIFIKACI … · 2012. 10. 3. · 3 Každý cukr je dehydrován v přítomnosti základního roztoku a pH indikátoru bromkresolové červeně.

1

AUXACOLOR™ 2 56513 20 testů KOLORIMETRICKÝ TEST ASIMILACE CUKRŮ K IDENTIFIKACI HLAVNÍCH LÉKAŘSKY VÝZNAMNÝCH KVASINEK.

Page 2: KOLORIMETRICKÝ TEST ASIMILACE CUKRŮ K IDENTIFIKACI … · 2012. 10. 3. · 3 Každý cukr je dehydrován v přítomnosti základního roztoku a pH indikátoru bromkresolové červeně.

2

1- KLINICKÝ VÝZNAM V průběhu posledních dvaceti let se výrazně zvýšila incidence mykotických infekcí, zejména infekcí způsobených kvasinkami, a podstatně se změnil i profil jejich výskytu v souvislosti s rostoucím výskytem oportunních infekcí. Detekce kvasinek v patologických vzorcích odebraných z povrchových i hlubokých tkání organismu má zásadní význam, vzhledem k variabilitě míst postižených infekcí a různorodosti druhů. Navíc vzhledem k opakovanému výskytu těchto infekcí a širšímu použití antimykotických léků se objevují rezistentní patogenní kmeny, proto je v současnosti nezbytné přesně identifikovat druh kvasinek, zodpovědný za infekci. AUXACOLOR™2 splňuje tento účel, jelikož umožňuje identifikovat druhy, které se nejčastěji vyskytují v klinické praxi. Test je snadno použitelný a interpretovatelný a může být snadno zaveden do všech laboratoří.

2- PRINCIP Test AUXACOLOR™ 2 je identifikační systém založený na principu asimilace cukrů. Růst kvasinek je vizualizován barevnou změnou pH indikátoru. Souprava dále obsahuje 3 enzymatické testy, včetně testu k detekci fenoloxidázové aktivity Cryptococcus neoformans.

3- DRUHY TESTŮ K POUŽITÍ Souprava obsahuje: • negativní kontrolu usnadňující interpretaci výsledků asimilace cukrů

(modrá jamka). • 13 výsledků asimilace cukrů, které odpovídají následujícím cukrům:

- glukóza (GLU.) : pozitivní kontrola - maltóza (MAL.) - celobióza (CEL.) - sacharóza (SAC.) - trehalóza (TRE.) - galaktóza (GAL.) - adonitol (ADO.) - laktóza (LAC.) - melezitóza (MEL.) - rafinóza (RAF.) - xylóza (XYL.) - inositol (INO.) - arabinóza (ARA.)

Page 3: KOLORIMETRICKÝ TEST ASIMILACE CUKRŮ K IDENTIFIKACI … · 2012. 10. 3. · 3 Každý cukr je dehydrován v přítomnosti základního roztoku a pH indikátoru bromkresolové červeně.

3

Každý cukr je dehydrován v přítomnosti základního roztoku a pH indikátoru bromkresolové červeně. Růst kvasinek je indikován změnou barvy indikátoru z modré na žlutou a zákalem v jamce. • Enzymatický test k detekci N-acetyl-galaktosaminidázové aktivity

(hexosaminidáza: HEX.). Pozitivní reakce se projevuje žlutým zbarvením jamky, zatímco u negativního testu zůstává obsah jamky bezbarvý.

• Fenoloxidázový test (POX) k detekci aktivity fenoloxidázy Cryptococcus neoformans spojený s testem k detekci prolin-arylamidázové aktivity (PRO): - hnědé zbarvení jamky indikuje positivní výsledek fenoloxidázové

(POX) aktivity - žluté zbarvení indikuje pozitivní výsledek prolin-arylamidázové

(PRO) aktivity - absence zbarvení nebo šedé zbarvení indikuje negativní reakci

pro oba testy. Koexistence POX a PRO testů v té samé jamce může být odůvodněna tím, že tyto dva testy nejsou nikdy zároveň oba pozitivní. Jediné možné profily jsou POX negativní/PRO negativní, POX pozitivní/PRO negativní, POX negativní/PRO pozitivní, přičemž kolorimetrická interpretace je popsána výše.

SCHÉMA USPOŘÁDÁNÍ MIKROTITRAČNÍ DESTIČKY AUXACOLOR™ 2

Page 4: KOLORIMETRICKÝ TEST ASIMILACE CUKRŮ K IDENTIFIKACI … · 2012. 10. 3. · 3 Každý cukr je dehydrován v přítomnosti základního roztoku a pH indikátoru bromkresolové červeně.

4

4- SLOŽENÍ SOUPRAVY Krabice s 20 testy, kód 56513, obsahující: • 20 x R1 jednotlivě balené 16-jamkové mikrotitrační destičky • 20 přilnavých fólií • 20 x R2 suspenzní médium hotové k použití • 1 složku s výsledkovými archy • 1 příbalový leták

5- UPOZORNĚNÍ A BEZPEČNOSTNÍ PŘEDPISY • Nepoužívejte soupravu po datu exspirace. • Zacházejte se všemi vzorky jako s potenciálně infekčním materiálem

a při kultivaci dodržujte aseptické laboratorní techniky. • Kontaminovaný materiál odkládejte do nádoby přizpůsobené pro

likvidaci laboratorního odpadu.

6- UCHOVÁVÁNÍ REAGENCIÍ • Reagencie musí být uchovávány při teplotě +2 až +8°C ve vlastních

obalech. Za těchto podmínek jsou reagencie stabilní až do data exspirace uvedeného na obalu.

• Po otevření obalu mikrotitrační destičky je možné destičku uchovávat při laboratorní teplotě po dobu 10 hodin, aniž by došlo ke změně účinnosti testu.

7- PRACOVNÍ POSTUP Dodávaný materiál Viz složení soupravy.

Nezbytný materiál, který není součástí dodávky • Opacity control kit, kód 56499. • Bakteriologická klička. • Pipety pro měření a dávkování 100 µl. • Nádoba na dezinfekční roztok nebo autoklávovatelná nádoba pro

likvidaci kontaminovaného materiálu. • Případně denzitometr.

Page 5: KOLORIMETRICKÝ TEST ASIMILACE CUKRŮ K IDENTIFIKACI … · 2012. 10. 3. · 3 Každý cukr je dehydrován v přítomnosti základního roztoku a pH indikátoru bromkresolové červeně.

5

Kroky pracovního postupu Před použitím nechte reagencie ustálit na laboratorní teplotu.

1. Inokulace mikrotitrační destičky

- Připravte si inokulum z kultury pěstované 24 až 48 h na Sabouraudově médiu (+/- antibiotika) nebo v chromogen-ním médiu (CandiSelect™ 4, kód 63746). Za sterilních podmínek vyočkujte do suspensního média (R2) dostatečné množství (1 až 5 identických kolonií) čistých kolonií daného kmene (bez baktérií a jiných kvasinek) tak, abyste získali zákal ekvivalentní zákalové kontrole dodávané pod kódovým označením soupravy 56499 (zákal odpovídající zákalovému standardu 1,5 McFarlanda). Důsledné dodržení zákalu inokula je nezbytné pro získání kvalitních výsledků.

- Homogenizujte suspenzi na třepačce.

- Pomocí pipety odeberte a rozplňte 100 µl inokula do každé jamky mikrotitrační destičky (R1).

- Přelepte mikrotitrační destičku (R1) přilnavou fólií, přitom dbejte na co nejvíc stejnoměrném přilnutí fólie k destičce. Inkubujte 48 hodin (v případě nutnosti 72 hod.) při 30 °C (± 2 °C).

2. Vyhodnocení výsledků Definitivní vyhodnocení by se mělo provést po 48 hodinách. Ačkoliv předběžné vyhodnocení po 24 hodinách může přinést správné skóre a identifikaci jistých kvasinek, doporučujeme, aby se definitivní vyhodnocení provedlo až po 48 hodinách.

Page 6: KOLORIMETRICKÝ TEST ASIMILACE CUKRŮ K IDENTIFIKACI … · 2012. 10. 3. · 3 Každý cukr je dehydrován v přítomnosti základního roztoku a pH indikátoru bromkresolové červeně.

6

Pokud existuje podezření na kryptokokovou infekci, mělo by se definitivní vyhodnocení provést až po 72 hodinách vzhledem k pomalému růstu těchto mikroorganismů. Vyhodnocení lze usnadnit kontrolou spodní strany mikrotitrační destičky či sejmutím adhezívní fólie, přitom je však nutné dodržovat obvyklá pravidla sterility pro případ, že bude nutné v inkubaci pokračovat. V takovém případě opatrně vyměňte adhezívní fólii, vyhodnoťte výsledky podle tabulky na straně 9 a zaznamenejte je do příslušného výsledkového archu.

3. Interpretace výsledků a) Jak interpretovat barevné reakce

Jamka Test Barva/Interepretace

Negativní kontrola Neg. k. Negativní kontrola Modrá

Negativní Pozitivní

GLU Glukóza (pozitivní kontrola) MAL Maltóza SAC Sacharóza GAL Galaktóza LAC Laktóza RAF Rafinóza INO Inositol CEL Celobióza TRE Trehalóza ADO Adonitol MEL Melezitóza XYL Xylóza

Test

y as

imila

ce c

ukrů

ARA Arabinóza

Modrá (a) nebo

zelená

Žlutá (b)

nebo bezbarvá

HEX Detekce aktivity N-acetyl-

galaktósaminidázy (hexosaminidáza)

Bezbarvá Žlutá

Detekce aktivity fenoloxidázy Cryptococcus neoformans

(POX) Hnědá

Enz

ymov

é te

sty

POX/PRO Detekce activity

prolin-arylamidázy (PRO)

Bezbarvá nebo šedá(c)

Žlutá (b)

Page 7: KOLORIMETRICKÝ TEST ASIMILACE CUKRŮ K IDENTIFIKACI … · 2012. 10. 3. · 3 Každý cukr je dehydrován v přítomnosti základního roztoku a pH indikátoru bromkresolové červeně.

7

(a) Modrošedá a modrozelená jsou považovány za negativní (b) Světle žlutá a žlutozelená jsou považovány za pozitivní (c) Některé kmeny Geotrichum capitatum, Geotrichum candidum, Trichosporon spp a Cryptococcus laurentii mohou způsobit šedohnědé zbarvení jamky. V tomto případě je reakce negativní a této jamce se musí při vyhodnocení přiřadit hodnota „nula“. b) Metoda vyhodnocení K identifikaci se používá 16 biochemických charakteristik rozdělených do 15 jamek (testy POX. a PRO. jsou kombinovány ve stejné jamce). • Pětimístný numerický profil se získá kombinací hodnot získaných z 15

testů do následujících trojmístných skupin:

1. číslice Glukóza Maltóza Sacharóza

2. číslice Galaktóza Laktóza Rafinóza

3. číslice Inositol Celobióza Trehalóza

4. číslice Adonitol Melezitóza Xylóza

5. číslice Arabinóza Hexosaminidáza Fenoloxidáza

Každé negativní reakci se přiřazuje skóre nula a každé pozitivní reakci se přiřazuje skóre podle pozice v dané trojici takto: 1 bod pro pozici 1 2 body pro pozici 2 4 body pro pozici 3

v dané trojici

Seskupením tří bodových hodnocení se získá číslo, které odpovídá pětičíselném numerickém profilu:

Např. : Glukóza + Maltóza + Sacharóza 1 + 2 + 4 = první číslice je 7 • Prolin-arylamidázová aktivita (jamka PRO: POX./PRO.) se hodnotí

jako + nebo jako - podle pozorovaného zbarvení. - žlutá jamka (světle žluté a žlutozelené zbarvení je považované za

pozitivní): pozitivní test PRO. - bezbarvá nebo šedá jamka (šedohnědé zbarvení je považované

za negativní): negativní test PRO.

Page 8: KOLORIMETRICKÝ TEST ASIMILACE CUKRŮ K IDENTIFIKACI … · 2012. 10. 3. · 3 Každý cukr je dehydrován v přítomnosti základního roztoku a pH indikátoru bromkresolové červeně.

8

• Aby hodnocení bylo kompletní, je nutno vypočíst další dvě dodatečné číslice pomocí výše zmíněné metody. Ty představují následné charakteristiky:

Pigmentace (PI.) Artrospóry (AR.) Pouzdro (CA.)

Mycelium/pseudomycelium (MY. PS-MY.) Chlamydospóry (CHL.) Růst při 37 °C

Konečná identifikace je založena na kombinaci biochemických testů a doplňujících kritérií (morfologických a metabolických) za obvyklých podmínek.

Příklady: KMEN GLU. MAL. SAC. GAL. LAC. RAF. INO. CEL. TRE. ADO. MEL. XYL. ARA. HEX. POX./ PRO. PI. AR. CA. MY./PS-MY. CHL. 37°C KMEN Č. 1 + + + + - - - - + - - + - + - + - - - + + + KMEN Č. 2 + - - - - - - - + - - - - - - - - - - - - + KMEN Č. 3 + + + + - + + - - + + - - - + - - - + - - +

Výpočet odpovídajících numerických profilů a identifikace:

Numerický profil Kmen Biochemické

testy Test PRO Další charakteristika

Identifikace

Kmen č. 1 71442 + 07 C. albicans Kmen č. 2 10400 - 04 C. glabrata Kmen č. 3 75134 - 44 C. neoformans

Poté, co byl stanoven numerický profil, je vyhledán v seznamu na straně 15 (originální příbalový leták). Pokud není získaný numerický profil uveden v seznamu (vzácný profil), použijte interpretační tabulku (strana 9).

Page 9: KOLORIMETRICKÝ TEST ASIMILACE CUKRŮ K IDENTIFIKACI … · 2012. 10. 3. · 3 Každý cukr je dehydrován v přítomnosti základního roztoku a pH indikátoru bromkresolové červeně.

9

37 °C

+

+

+

+

V +

+

+

+

+

V +

+

+

+

- +

- (+

)

V - +

-

- (+

)

+

- V V V +

+

+

V +

CHL.

+ (-

)

+ (-

)

- +

- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

MY.

PS

-MY.

+

+

+

+

- - +

-

+ (-

)

+

+

+ (-

)

+

+

+

+

+

+

- - - - +

+

- - -

- (+

)

+

+

+

+

-

CA.

- - - - - - - - - - - - - - - - - - +

+

+

+

- - - - - - - - - - -

AR.

- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - +

+

- - - - +

+

+

+

-

PI. - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - +

+

- - - - - -

+

- - +

V - +

V -

- (+

)

+ (-

)

V +

V V V

- (+

)

+ (-

)

V - - V

- (+

)

- - +

+

- - - - +

(-)

-

POX.

/PR

O.

- - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

+ (-

)

-

- (+

)

- - - - - - - - - -

HEX

.

+ (-

)

+

V

+ (-

)

- - - - - - - - - - -

+ (-

)

-

- (+

)

- - - - - - - V V -

+ (-

)

+ (-

)

V V -

ARA

.

V V +

- V - +

- V - - V - +

- (+

)

- - - V +

V V - - - V V - V V +

+ (-

)

-

XYL

.

+ (-

)

V +

- V -

+ (-

)

- V - -

+ (-

)

- (+

)

+ (-

)

V V +

- +

+

V

+ (-

)

+

- - V V - V +

+

+ (-

)

-

MEL

.

V - -

- (+

)

+ (-

)

-

+ (-

)

- - - - +

-

+ (-

)

- +

+

- +

+

+ (-

)

+

- - - +

V V V +

+

V -

AD

O.

V V +

+ (-

)

+

-

+ (-

)

-

- (+

)

-

- (+

)

V - V V V

+ (-

)

V V +

V V V - - V V - V -

+ (-

) V -

TRE.

+ (-

)

V +

V +

+

+

- (+

)

- (+

)

- - +

-

+ (-

)

- +

+

+ (-

)

V +

V V - - - +

V V V

+ (-

)

+

+ (-

)

+

CEL.

- - V - +

- +

- V -

- (+

)

+

+ (-

)

- - V V

- (+

)

+

+

V - - - +

V V - +

+

+

+

-

INO

.

- - +

- - - - - - - - - - - - - - - V +

+

+

- - - - - - V

+ (-

)

+

V -

RAF.

- -

+ (-

)

- +

-

+ (-

)

- +

- - - - - - - - - V +

V V - - - V +

+ (-

)

- - +

V -

LAC.

- - - - V

- (+

)

- -

+ (-

)

- -

- (+

)

- - - - - - V +

- - - - - - - - +

+

+

+

V

GA

L.

+

+

+

+

+

- +

- +

-

- (+

)

+ (-

)

- +

+ (-

)

V +

- (+

)

V +

+

V

+ (-

)

V - V V V +

V +

+ (-

)

+ (-

)

SAC.

+

- +

+

+

- +

- +

- - +

- +

- +

+ (-

)

- +

+

+

+

- - - +

+

+

V +

+

+ (-

)

-

MA

L.

+

+

+

+

+

- +

- - - - +

- +

- +

+

- +

+

+

+

- - - +

V

+ (-

)

+

+

+

+

-

GLU

.

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

INTE

RP

RET

TAB

ULK

A

DR

UH

Y

C. A

LBIC

ANS

1

C. A

LBIC

ANS

2 (1

)

C. C

IFER

RII

C. D

UBL

INIE

NSI

S

C. F

AMAT

A

C. G

LABR

ATA

C. G

UIL

LIER

MO

ND

II

C. I

NC

ON

SPIC

UA

C. K

EFYR

C. K

RUSE

I

C. L

IPO

LYTI

CA

C. L

USI

TAN

IAE

C. N

ORV

EGEN

SIS

C. P

ARAP

SILO

SIS

C. R

UG

OSA

C. S

AKE

C. T

ROPI

CAL

IS

C. Z

EYLA

NO

IDES

C. A

LBID

US

C. L

AURE

NTI

I

C. N

EOFO

RMAN

S

C. U

NIG

UTT

ULA

TUS

G. C

AND

IDU

M

G. C

APIT

ATU

M

K. A

PIC

ULA

TA

R. G

LUTI

NIS

R. M

UC

ILAG

INO

SA (R

UBR

A)

S. C

EREV

ISIA

E

T. A

SAH

II

T. IN

KIN

T. M

UC

OID

ES

T. S

PP

P. W

ICKE

RHAM

II (2

)

Page 10: KOLORIMETRICKÝ TEST ASIMILACE CUKRŮ K IDENTIFIKACI … · 2012. 10. 3. · 3 Každý cukr je dehydrován v přítomnosti základního roztoku a pH indikátoru bromkresolové červeně.

10

POPISEK (1) C. albicans 2: odpovídá kmenům dříve klasifikovaným pod druhem C. stellatoidea, nachází se vzácně. (2) P. wickerhamii: jedná se o patogenní jednobuněčnou řasu, která roste snadno na médiích pro izolaci kvasinek a má stejný makroskopický vzhled jako kvasinky. Mikroskopické vyšetření odhalí kulaté buňky rozdělené vnitřními přepážkami. + : Test pozitivní minimálně pro 99 % kmenů - : Test negativní minimálně pro 99 % kmenů V : Variabilní test +(-) : Test pozitivní minimálně pro 95 % kmenů nebo test

s opožděnou expresí (48 hod. nebo 72 hod.) -(+) : Test negativní minimálně pro 95 % kmenů PI. : Pigmentace AR. : Artrospory CA. : Pouzdro MY. : Mycelium (P.C.B. médium) PS-MY. : Pseudomycelium (P.C.B. médium) CHL. : Chlamydospory 37 °C : Růst při 37 °C

Page 11: KOLORIMETRICKÝ TEST ASIMILACE CUKRŮ K IDENTIFIKACI … · 2012. 10. 3. · 3 Každý cukr je dehydrován v přítomnosti základního roztoku a pH indikátoru bromkresolové červeně.

11

c) Poznámky 1- Identifikace kvasinek je založena jak na jejich biochemických

charakteristikách určených na mikrotitrační destičce AUXACOLOR™ 2, tak na jejich morfologických charakteristikách, které se přednostně stanovují na médiu PCB, nebo případně na médiu RAT. Je nutné získat všechny tyto údaje. Pro identifikaci je nutno zároveň vzít v úvahu původ vzorků, klinické souvislosti, a případně i výsledky doplňujících testů.

2- Při interpretaci výsledků je nutno brát v potaz původ vzorků a klinický kontext.

3- Druhy Rhodotorula glutinis a Rhodotorula mucilaginosa jsou sice uvedeny v interpretační tabulce, avšak jejich numerické profily nejsou specifikovány, protože mnohé jejich znaky jsou variabilní. Tyto 2 druhy jsou charakterizovány lososově růžovou pigmentací kolonií, která se často objevuje po 48 hodinách kultivace.

4- Kvasinky rodu Cryptococcus tvoří pouzdro, které může být výrazně nespojité.

5- Morfologie kvasinek Kloeckera apiculata je charakteristická, která umožňuje jejich rozlišení od druhů se stejnými numerickými profily: velmi malé kvasinky protáhlého tvaru s bipolárními pupeny ( podobné citrónu).

6- Pro potvrzení identifikace některých druhů kvasinek nebo pro rozlišení druhů se stejnými numerickými profily může být vhodné provedení doplňujících testů: - test asimilace dusičnanu draselného je možné použít k odlišení

kvasinek jako jsou Cryptococcus albidus (pozitivní test) a Cryptococcus laurentii (negativní test) nebo Rhodotorula mucilaginosa (negativní test) a Rhodotorula glutinis (pozitivní test).

- stanovení ureázy na urea-indolovém médium slouží k potvrzení identifikace rodu Cryptococcus. Tento test je pozitivní do 4 hodin u Cryptococcus neoformans a do 24 hodin u ostatních druhů.

- redukce tetrazolia odlišuje Candida tropicalis (pozitivní reakce) od Candida lusitaniae (negativní reakce).

Page 12: KOLORIMETRICKÝ TEST ASIMILACE CUKRŮ K IDENTIFIKACI … · 2012. 10. 3. · 3 Každý cukr je dehydrován v přítomnosti základního roztoku a pH indikátoru bromkresolové červeně.

12

8- ÚČINNOST TESTU Souprava AUXACOLOR™ 2 umožňuje identifikovat 31 druhů kvasinek a jeden druh jednobuněčných řas Prototheca wickerhamii. V porovnání se soupravou AUXACOLOR™ umožňuje tato souprava identifikovat 7 nových druhů kvasinek:

Candida ciferrii, Candida dubliniensis, Candida sake, Kloeckera apiculata, Trichosporon asahii, Trichosporon inkin a Trichosporon mucoides.

Prospektivní klinická studie a v retrospektivní studie 120 kmenů, které tvořily reprezentativní vzorek druhů identifikovaných soupravou AUXACOLOR™ 2, ukázaly že: - 92,5 % testovaných kmenů bylo identifikováno do 48 hod. (59,2 %

do 24 h), a to vzhledem k použití nových testů v soupravě (hexosaminidázový test a prolinarylamidázový test), rovněž však díky komplementaci seznamu numerických profilů pro druhy uvedené v návodu k použití.

- Souprava AUXACOLOR™ 2 je schopna rozlišit všechny kmeny Candida dubliniensis (5 testovaných kmenů) a Candida albicans (15 kmenů).

- Kombinace prolin-arylamidázového testu a fenoloxidázového testu je dalším testem na mikrotitrační destičce, který je vhodný k identifikaci kmenů Candida glabrata (9 kmenů, které jsou odlišeny od Candida zeylanoides) nebo k odlišení Candida krusei (6 kmenů) a Candida lipolytica (4 kmeny).

- POX test umožnil detekci fenoloxidázové aktivity Cryptococcus neoformans u 4 testovaných kmenů.

9- OMEZENÍ TESTU

1- Souprava AUXACOLOR™ 2 umožňuje identifikovat pouze druhy kvasinek uvedené v interpretační tabulce.

2- U uvedených druhů uvádí databáze pouze nejčastější numerické profily. Numerický profil, který není uveden v seznamu, může odpovídat vzácnému profilu uvedeného druhu nebo profilu druhu, který není uveden. Doplňující údaje k informacím v databázi jsou uvedeny v interpretační tabulce.

Page 13: KOLORIMETRICKÝ TEST ASIMILACE CUKRŮ K IDENTIFIKACI … · 2012. 10. 3. · 3 Každý cukr je dehydrován v přítomnosti základního roztoku a pH indikátoru bromkresolové červeně.

13

3- Některé vzácné druhy, které nejsou uvedeny v návodu k použití, mohou mít ve výjimečných případech stejný numerický profil jako druh uvedený v tabulce.

4- Mikrotitrační destička AUXACOLOR™ 2 musí být použita pouze s čistými kmeny. Kombinace kvasinek jsou detekovány u 16 % vzorků. Vizualizace kombinací kvasinek je umožněna paralelně kultivací na CandiSelect™ 4 nebo médiu PCB a testem AUXACOLOR™ 2.

5- V některých případech může použité izolační médium ovlivnit barevnou změnu určitých testů za 24 hod. (xylóza, hexosaminidáza), avšak neinterferuje s identifikací kvasinek po 48 hodinách.

6- Fenoloxidázový / prolin-arylamidázový test: - některé výjimečné kmeny Cryptococcus neoformans nemusí

projevovat fenoloxidázový znak. - některé kmeny Geotrichum capitatum, Geotrichum candidum,

Trichosporon spp a Cryptococcus laurentii mohou indukovat kaštanově šedé zbarvení jamky. V tomto případě je reakce negativní a při vyhodnocení musí být této jamce přiřazena hodnota nula.

- některé kmeny Prototheca wickerhamii mohou vyjadřovat charakteristiku prolin arylamidázy

7- Neměl by být brán zřetel na případy změny pozitivního výsledku na výsledek negativní, tj. změnu barvy původně interpretovanou jako pozitivní na negativní. Např. jamka, která je žlutá po 24 nebo 48 hodinách a pak zezelená nebo zmodrá po 48 nebo 72 hodinách, je považována za pozitivní.

8- Na druhou stranu jakákoliv změna z negativního výsledku na výsledek pozitivní během prvních 72 hodin musí být brána v potaz: jamka by měla byt považována za pozitivní. Např. jamka, která je modrošedá a modrozelená po 24 nebo 48 hodinách a pak zežloutne po 48 nebo 72 hodinách, je považována za pozitivní

10- KONTROLA KVALITY Mikrotitrační destičky AUXACOLOR™ 2 (R1) jsou podrobeny kontrole kvality pomocí panelu čistých kmenů s dobře definovanými biochemickými charakteristikami.

Page 14: KOLORIMETRICKÝ TEST ASIMILACE CUKRŮ K IDENTIFIKACI … · 2012. 10. 3. · 3 Každý cukr je dehydrován v přítomnosti základního roztoku a pH indikátoru bromkresolové červeně.

14

Aktivitu soupravy je možné rovněž zkontrolovat v laboratoři pomocí následujících referenčních kmenů:

KMENY NEG. GLU. MAL. SAC. GAL. LAC. RAF. INO. CEL. TRE. ADO. MEL. XYL. ARA. HEX. POX/PRO

C. NEOFORMANS ATCC 32045

- + + + + - - + V V - V V V - + -

T. MUCOIDES BCCM/IHEM 14146

- + + + + + + + + + + + + + + - -

C. LIPOLYTICA IP 817.63

- + - - - - - - - - - - - - - - +

Znaky pozorované po 48 hod. inkubace u kmenů kultivovaných na Sabouraudově agaru.

ATCC: American Type Culture Collection, 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852, USA.

BCCM / IHEM: Belgian Co-ordinated Collections of Micro-organisms / IHEM Culture Collection, Scientific Institute of Public Health – Louis Pasteur, Mycology Section, Rue J. Wytsmanstraat 14, B-1050 Brussels

IP: Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, Institut Pasteur, 25 rue du Docteur Roux, 75724 Paris cedex 15, France

11- KONTROLA KVALITY VÝROBCE Všechny vyrobené reagencie jsou připraveny v souladu s naším systémem kvality, od převzetí surovin až po výslednou komercializaci výrobku. Každá skupina výrobků je podrobena hodnocení kontroly kvality a je uvedena na trh, pouze pokud splňuje předem specifikovaná akceptační kritéria. Záznamy týkající se produkce a kontroly každé skupiny výrobků jsou uchovány v Bio-Radu.

12- LITERATURA Viz francouzská verze.

KRUG-R
Image importée
Page 15: KOLORIMETRICKÝ TEST ASIMILACE CUKRŮ K IDENTIFIKACI … · 2012. 10. 3. · 3 Každý cukr je dehydrován v přítomnosti základního roztoku a pH indikátoru bromkresolové červeně.

15

Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincaré 92430 Marnes-la-Coquette France Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00 Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33

10/2005 code: 880050

Page 16: KOLORIMETRICKÝ TEST ASIMILACE CUKRŮ K IDENTIFIKACI … · 2012. 10. 3. · 3 Každý cukr je dehydrován v přítomnosti základního roztoku a pH indikátoru bromkresolové červeně.

15

Code10000 -(+) 05 Candida krusei10000 - 25 Geotrichum capitatum10000 +(-) 01 Candida zeylanoides10000 +(-) 05 Candida lipolytica10000 + 05 Candida norvegensis10000 v 04 Candida inconspicua10010 +(-) 01 Candida zeylanoides10010 +(-) 05 Candida lipolytica10040 -(+) 21 Geotrichum candidum10200 - 00 Kloeckera apiculata10200 + 05 Candida norvegensis10200 +(-) 05 Candida lipolytica10240 + 05 Candida norvegensis10400 - 04 Candida glabrata10400 +(-) 01 Candida zeylanoides10402 +(-) 01 Candida zeylanoides10410 +(-) 01 Candida zeylanoides10600 +(-) 01 Candida zeylanoides10610 +(-) 01 Candida zeylanoides

33242 - 25 Trichosporon asahii33243 - 25 Trichosporon asahii33262 - 25 Trichosporon asahii33263 - 25 Trichosporon asahii33342 - 25 Trichosporon asahii33343 - 25 Trichosporon asahii33362 - 25 Trichosporon asahii33363 - 25 Trichosporon asahii33642 - 25 Trichosporon asahii33643 - 25 Trichosporon asahii33662 - 25 Trichosporon asahii33663 - 25 Trichosporon asahii33742 - 25 Trichosporon asahii33743 - 25 Trichosporon asahii33762 - 25 Trichosporon asahii11000 - 25 Geotrichum capitatum

11000 +(-) 05 Candida lipolytica11000 v 05 Candida rugosa11001 v 05 Candida rugosa11010 +(-) 05 Candida lipolytica11010 v 05 Candida rugosa11040 v 05 Candida rugosa11040 -(+) 21 Geotrichum candidum11041 v 05 Candida rugosa11050 v 05 Candida rugosa11050 -(+) 21 Geotrichum candidum11400 - 04 Prototheca wickerhamii11400 +(-) 01 Candida zeylanoides11410 +(-) 01 Candida zeylanoides11600 +(-) 01 Candida zeylanoides11610 +(-) 01 Candida zeylanoides

12400 - 04 Candida glabrata

13400 - 04 Prototheca wickerhamii

55000 - 05 Candida kefyr55001 - 05 Candida kefyr55040 - 05 Candida kefyr55041 - 05 Candida kefyr

Code31052 - 07 Candida albicans 231402 - 07 Candida albicans 231442 - 07 Candida albicans 231452 - 07 Candida albicans 231472 - 07 Candida albicans 2

57000 - 05 Candida kefyr57001 - 05 Candida kefyr57010 - 05 Candida kefyr57011 - 05 Candida kefyr57040 - 05 Candida kefyr57041 - 05 Candida kefyr57050 - 05 Candida kefyr57051 - 05 Candida kefyr57200 - 05 Candida kefyr57201 - 05 Candida kefyr57240 - 05 Candida kefyr57241 - 05 Candida kefyr57400 - 05 Candida kefyr57401 - 05 Candida kefyr57440 - 05 Candida kefyr57441 - 05 Candida kefyr

31002 - 07 Candida albicans 231042 - 07 Candida albicans 2

KRUG-R
Image importée
Page 17: KOLORIMETRICKÝ TEST ASIMILACE CUKRŮ K IDENTIFIKACI … · 2012. 10. 3. · 3 Každý cukr je dehydrován v přítomnosti základního roztoku a pH indikátoru bromkresolové červeně.

16

Code57600 - 05 Candida kefyr57601 - 05 Candida kefyr57640 - 05 Candida kefyr57641 - 05 Candida kefyr

71002 + 07 Candida dubliniensis71010 + 07 Candida dubliniensis71012 + 07 Candida dubliniensis71021 v 05 Candida parapsilosis71031 v 05 Candida parapsilosis71042 + 07 Candida albicans171052 + 07 Candida albicans 171061 v 05 Candida parapsilosis71071 v 05 Candida parapsilosis71124 - 44 Cryptococcus neoformans71125 - 44 Cryptococcus neoformans71134 - 44 Cryptococcus neoformans71135 - 44 Cryptococcus neoformans71164 - 44 Cryptococcus neoformans71165 - 44 Cryptococcus neoformans71174 - 44 Cryptococcus neoformans71175 - 44 Cryptococcus neoformans71324 - 44 Cryptococcus neoformans

Code71325 - 44 Cryptococcus neoformans71334 - 44 Cryptococcus neoformans71335 - 44 Cryptococcus neoformans71400 - 04 Saccharomyces cerevisiae71402 + 07 Candida dubliniensis71410 + 07 Candida dubliniensis71411 v 05 Candida parapsilosis71412 + 07 Candida dubliniensis71420 - 04 Saccharomyces cerevisiae71421 v 05 Candida parapsilosis71422 v 01 Candida sake71430 + 07 Candida dubliniensis71431 v 05 Candida parapsilosis71432 v 01 Candida sake71432 + 07 Candida dubliniensis71440 + 07 Candida albicans 171441 + 07 Candida albicans 171442 + 07 Candida albicans 171443 + 07 Candida albicans 171450 + 07 Candida albicans 171451 + 07 Candida albicans 171451 v 05 Candida parapsilosis71452 + 07 Candida albicans 171453 + 07 Candida albicans 171460 -(+) 05 Candida tropicalis71461 v 05 Candida parapsilosis71462 v 01 Candida sake71462 + 07 Candida albicans 171470 -(+) 05 Candida tropicalis71471 v 05 Candida parapsilosis71472 v 01 Candida sake71472 + 07 Candida albicans 171473 + 07 Candida albicans 171524 - 44 Cryptococcus neoformans71525 - 44 Cryptococcus neoformans71534 - 44 Cryptococcus neoformans71535 - 44 Cryptococcus neoformans71553 - 05 Candida ciferrii71560 v 40 Cryptococcus uniguttulatus71561 v 40 Cryptococcus uniguttulatus71564 - 44 Cryptococcus neoformans

70160 v 40 Cryptococcus uniguttulatus70161 v 40 Cryptococcus uniguttulatus70170 v 40 Cryptococcus uniguttulatus70171 v 40 Cryptococcus uniguttulatus70400 - 04 Saccharomyces cerevisiae70462 v 01 Candida sake70560 v 40 Cryptococcus uniguttulatus70561 v 40 Cryptococcus uniguttulatus70570 v 40 Cryptococcus uniguttulatus70571 v 40 Cryptococcus uniguttulatus70620 v 05 Candida lusitaniae70660 v 40 Cryptococcus albidus70661 v 40 Cryptococcus albidus70662 v 01 Candida sake70670 v 05 Candida lusitaniae70760 v 40 Cryptococcus albidus70761 v 40 Cryptococcus albidus

KRUG-R
Image importée
Page 18: KOLORIMETRICKÝ TEST ASIMILACE CUKRŮ K IDENTIFIKACI … · 2012. 10. 3. · 3 Každý cukr je dehydrován v přítomnosti základního roztoku a pH indikátoru bromkresolové červeně.

17

Code71565 - 44 Cryptococcus neoformans71570 v 40 Cryptococcus uniguttulatus71571 v 40 Cryptococcus uniguttulatus71574 - 44 Cryptococcus neoformans71575 - 44 Cryptococcus neoformans71620 v 05 Candida lusitaniae71620 v 40 Cryptococcus albidus71630 v 05 Candida lusitaniae71660 -(+) 05 Candida tropicalis71660 v 05 Candida lusitaniae71661 v 05 Candida lusitaniae71662 v 01 Candida sake71670 -(+) 05 Candida tropicalis71670 v 05 Candida lusitaniae71670 v 40 Cryptococcus albidus71671 + 05 Candida guilliermondii71671 v 05 Candida lusitaniae71672 v 01 Candida sake71724 - 44 Cryptococcus neoformans71725 - 44 Cryptococcus neoformans71734 - 44 Cryptococcus neoformans71735 - 44 Cryptococcus neoformans71764 - 44 Cryptococcus neoformans71765 - 44 Cryptococcus neoformans71774 - 44 Cryptococcus neoformans71775 - 44 Cryptococcus neoformans

72762 - 25 Trichosporon inkin72763 - 25 Trichosporon inkin

Code73653 -(+) 21 Trichosporon spp73661 -(+) 21 Trichosporon spp73662 -(+) 25 Trichosporon spp73663 - 25 Trichosporon asahii73670 v 05 Candida lusitaniae73671 -(+) 21 Trichosporon spp73673 -(+) 21 Trichosporon spp73741 -(+) 21 Trichosporon spp73742 - 25 Trichosporon asahii73743 - 25 Trichosporon asahii73751 -(+) 21 Trichosporon spp73753 -(+) 21 Trichosporon spp73761 -(+) 21 Trichosporon spp73762 -(+) 25 Trichosporon spp73763 -(+) 25 Trichosporon spp73771 -(+) 21 Trichosporon spp73773 -(+) 21 Trichosporon spp

74000 - 04 Saccharomyces cerevisiae74020 - 04 Saccharomyces cerevisiae74361 v 40 Cryptococcus albidus74371 v 40 Cryptococcus albidus74400 - 04 Saccharomyces cerevisiae74420 - 04 Saccharomyces cerevisiae74560 v 40 Cryptococcus uniguttulatus74561 v 40 Cryptococcus uniguttulatus74570 v 40 Cryptococcus uniguttulatus74571 v 40 Cryptococcus uniguttulatus74660 v 40 Cryptococcus albidus74661 v 40 Cryptococcus albidus74760 v 40 Cryptococcus albidus74761 v 40 Cryptococcus albidus74771 v 40 Cryptococcus albidus

73242 - 25 Trichosporon asahii73243 - 25 Trichosporon asahii73262 - 25 Trichosporon asahii73263 - 25 Trichosporon asahii73342 - 25 Trichosporon asahii73343 - 25 Trichosporon asahii73362 - 25 Trichosporon asahii73363 - 25 Trichosporon asahii73641 -(+) 21 Trichosporon spp73642 -(+) 25 Trichosporon spp73643 - 25 Trichosporon asahii73651 -(+) 21 Trichosporon spp

75000 - 04 Saccharomyces cerevisiae75020 - 04 Saccharomyces cerevisiae75124 - 44 Cryptococcus neoformans75125 - 44 Cryptococcus neoformans75134 - 44 Cryptococcus neoformans75135 - 44 Cryptococcus neoformans75164 - 44 Cryptococcus neoformans75165 - 44 Cryptococcus neoformans

KRUG-R
Image importée
Page 19: KOLORIMETRICKÝ TEST ASIMILACE CUKRŮ K IDENTIFIKACI … · 2012. 10. 3. · 3 Každý cukr je dehydrován v přítomnosti základního roztoku a pH indikátoru bromkresolové červeně.

18

Code75774 - 44 Cryptococcus neoformans75775 - 44 Cryptococcus neoformans

76361 v 40 Cryptococcus albidus76371 v 40 Cryptococcus albidus76761 v 40 Cryptococcus albidus76771 v 40 Cryptococcus albidus

Code75174 - 44 Cryptococcus neoformans75175 - 44 Cryptococcus neoformans75324 - 44 Cryptococcus neoformans75325 - 44 Cryptococcus neoformans75334 - 44 Cryptococcus neoformans75335 - 44 Cryptococcus neoformans75361 v 40 Cryptococcus albidus75371 v 40 Cryptococcus albidus75400 - 04 Saccharomyces cerevisiae75420 - 04 Saccharomyces cerevisiae75524 - 44 Cryptococcus neoformans75525 - 44 Cryptococcus neoformans75534 - 44 Cryptococcus neoformans75535 - 44 Cryptococcus neoformans75551 - 05 Candida ciferrii75553 - 05 Candida ciferrii75560 v 40 Cryptococcus uniguttulatus75561 v 40 Cryptococcus uniguttulatus75564 - 44 Cryptococcus neoformans75565 - 44 Cryptococcus neoformans75570 v 40 Cryptococcus uniguttulatus75571 v 40 Cryptococcus uniguttulatus75574 - 44 Cryptococcus neoformans75575 - 44 Cryptococcus neoformans75630 v 00 Candida famata75631 + 05 Candida guilliermondii75631 v 00 Candida famata75651 v 00 Candida famata75670 v 00 Candida famata75671 + 05 Candida guilliermondii75671 v 00 Candida famata75724 - 44 Cryptococcus neoformans75725 - 44 Cryptococcus neoformans75734 - 44 Cryptococcus neoformans75735 - 44 Cryptococcus neoformans75751 - 05 Candida ciferrii75753 - 05 Candida ciferrii75761 v 40 Cryptococcus albidus75764 - 44 Cryptococcus neoformans75765 - 44 Cryptococcus neoformans75771 v 40 Cryptococcus albidus

77361 v 40 Cryptococcus albidus77371 v 40 Cryptococcus albidus77610 v 00 Candida famata77611 v 00 Candida famata77630 v 00 Candida famata77631 v 00 Candida famata77641 -(+) 21 Trichosporon spp77643 -(+) 21 Trichosporon spp77651 -(+) 21 Trichosporon spp77651 v 00 Candida famata77653 -(+) 21 Trichosporon spp77661 -(+) 21 Trichosporon spp77663 -(+) 21 Trichosporon spp77670 v 00 Candida famata77671 -(+) 21 Trichosporon spp77671 v 00 Candida famata77673 -(+) 21 Trichosporon spp77741 -(+) 21 Trichosporon spp77742 -(+) 21 Trichosporon spp77743 -(+) 21 Trichosporon spp77751 -(+) 21 Trichosporon spp77753 -(+) 21 Trichosporon spp77761 -(+) 21 Trichosporon spp77761 v 40 Cryptococcus albidus77763 - 25 Trichosporon mucoides77771 - 25 Trichosporon mucoides77771 - 40 Cryptococcus laurentii77771 v 40 Cryptococcus albidus77772 -(+) 21 Trichosporon spp77773 - 25 Trichosporon mucoides

KRUG-R
Image importée
Page 20: KOLORIMETRICKÝ TEST ASIMILACE CUKRŮ K IDENTIFIKACI … · 2012. 10. 3. · 3 Každý cukr je dehydrován v přítomnosti základního roztoku a pH indikátoru bromkresolové červeně.

12-BIBLIOGRAPHY1. C.P. KURTZMAN, J.W. FELL

The Yeasts. A taxonomic study, Fourth Revised and Enlarged Edition.Editions Elsevier 1998.

2. BH COOPER, M. SILVA-HUNTERYeasts of medical importance. Manual of clinical microbiology. Fourth edition. 1985, p 526-541.

3. H. KOENIGGuide de mycologie médicale. Editions Ellipses 1995, p 31-96.

4. H. FRICKER-HIDALGO, B. LEBEAU, P. KERVROEDAN, O. FAURE, P. AMBROISE-THOMAS, R. GRILLOTAUXACOLOR TM, a new commercial system for yeast identification:evaluation of 182 strains comparatively with ID 32C. Ann. Biol. Clin. (Paris). 1995; 53 (4): 221-5.

5. H. FRICKER, D. MONGET, B. LEBEAU, M. BABOLAT, P. AMBROISE-THOMAS, R. GRILLOTRapid identification of Candida albicans: evaluation of “Rapidecalbicans". Study of 444 yeast strains. Ann. Biol. Clin. (Paris). 1992; 50 (2): 103-6.

6. D. SULLIVAN , D. COLEMANCandida dubliniensis : characteristics and identification.J. Clin. Microbiol. 1998 ; 36 (2) : 329-334.

7. H.S.WANG, R.T. ZEIMIS, G.D. ROBERTSEvaluation of a caffeic acid-ferric citrate test for rapid identification ofCryptococcus neoformans. J. Clin. Microbiol. 1977; 6 (5): 445-9.

Page 21: KOLORIMETRICKÝ TEST ASIMILACE CUKRŮ K IDENTIFIKACI … · 2012. 10. 3. · 3 Každý cukr je dehydrován v přítomnosti základního roztoku a pH indikátoru bromkresolové červeně.
Page 22: KOLORIMETRICKÝ TEST ASIMILACE CUKRŮ K IDENTIFIKACI … · 2012. 10. 3. · 3 Každý cukr je dehydrován v přítomnosti základního roztoku a pH indikátoru bromkresolové červeně.

Bio-Rad3, boulevard Raymond Poincaré92430 Marnes-la-Coquette FranceTel. : +33 (0) 1 47 95 60 00 10/2005Fax.: +33 (0) 1 47 41 91 33 code: 880050


Recommended