Retikulocytární

hemoglobin

Soňa Vytisková

1

Úvod

2

3

Erytropoeza

Proerytroblast Basofilní

erytroblast Polychromatický

erytroblast

Ortochromatický

erytroblast

Retikulocyt Erytrocyt

Zmenšování velikosti buňky

Nárůst syntézy HGB

Kostní dřeň Krev

1-3 dny KD / 1-2dny PK

Retikulocyt obsahuje zbytky organel obsahující RNA (ribozomy, zbytky

endoplazmatického retikula).

Erytrocyty a retikulocyty

Vzhledem k tomu, že normální doba života RBC je 120 dní, zhruba 1/120 (~1%) nových RBC musí být denně doplněno do periferní krve, aby byl zachován jejich konstantní počet.

Erytrocyty jsou „dlouhověké“ a mohou nám vypovídat o erytropoetické aktivitě během několika posledních měsíců.

◦Erytrocyty již neprodukují nový hemoglobin.

Naproti tomu retikulocyty jsou „krátkověké“ a mohou nám proto poskytnout informace o aktuální erytropoetické aktivitě.

◦Retikulocyty stále produkují Hgb.

Erytrocyty – nové parametry

5

HPO -% hypochromních erytrocytů

HPR -% hyperchromních erytrocytů

MIC - % mikrocytů

MAC - % makrocytů

střední koncentrace korpuskulárního HGB

obsah korpuskulárního HGB

šíře distribuce dle koncentrace HGB

šíře distribuce dle obsahu buněčného hemoglobinu

stanovení počtu fragmentů (schistocytů)

Retikulocyty – nové parametry

6

Retikulohematokrit

Koncentrace HGB v retikulocytech

Rozdíl mezi koncentrací HGB v RBC a RETI

Střední objem RETI

Střední obsah HGB v RETI- Ret-He, CHr, MCHr (od 6. 4. 2016 – žádanka)

Šíře distribuce RETI

Mladší a starší vývojové formy RETI (IRF, LFR, MFR, HFR)

Střední koncentrace korpuskulárního HGB v RETI

Obsah buněčného HGB v RETI

Šíře distribuce dle koncentrace HGB v RETI

Šíře distribuce dle buněčného obsahu HGB v RETI

Princip stanovení

7

Retikulocyty – metody stanovení

8

Mikroskop:

barvení brilantkresylovou nebo metylenovou

modří – barví se tzv. substatnia granulofilametosa

Fluorescenční metoda: Sysmex

Abbott

Cytochemická metoda: Beckman Coulter

Advia

Dle množství zbytkové RNA rozeznáváme zralé a nezralé retikulocyty (IRF).

9

Mieho teorie Při průchodu světla skrze kulovitý (sférický) objekt dochází k jeho odchýlení (difrakci)

o vnitřní strukturu objektu

Publikováno 1908

Kulaté částice rozptylují světlo tak, že rozptýlené světlo tyto částice popisuje co do

velikosti a obsahu

Mieho teorii lze aplikovat na jakýkoli kulovitý objekt - erytrocyty nevyjímaje, avšak za

předpokladu, že jsou izovolumetricky sferizovány.

Mohandas et al. Accurate and independent measurement of volume and hemoglobin

concentration of individual red cells by laser scattering, Blood, 1986: 68:506-213

10

Mieho teorie

High refractive index Low refractive index

Princip stanovení

Advia

11

Advia – parametr CHr

12

Erytrogram, histogram CHr

13

Princip stanovení

Abbott

14

Sapphire – parametr MCHr

15

Laser

488 nm

Optical flow

cell

7º detector

0º detector

PMT2 PMT3

PMT1

90º detector

FL1

detector

• Identifikace retikulocytů

•FL1 (intensita fluorescence, RNA)

•Koncentrace hemoglobinu v buňce

•IAS (lom světla v 7º; log + lin)

•PSS (lom světla 90º)

•Objem buňky

•ALL (lom světla 0º)

•PSS (lom světla 90º)

Put science on your side.

Optické RBC parametery Diagram „Objem vs. CHC“ (MCVr, MCHr, CHCr)

MCVr

85.7 fL

CHCr

289 g/L

MCHr = MCVr x CHCr

Červené tečky: RBC

Zelené tečky: retikulocyty

Put science on your side.

Erytrogram

Červené tečky: RBC

Zelené tečky: retikulocyty

Normocytic, normochromic Microcytic, hypochromic

--------

Microcytic------

------

Macrocytic------ -

----

-

Hypochro

mic

---

-

Princip stanovení Sysmex

18

19

RET Channel – RET-He vs. RBC-He

RBC-He

● RBC haemoglobin equivalent

● Calculated from RET-RBC-Y

RB

C-

Are

a

IRF - Area LFR-Area

Fluorescence-Thrombocytes

Fluorescent light intensity

Fo

rward

scatt

ere

d l

igh

t in

ten

sit

y

DELTA-He

RET-He - RBC-He

RBC-He

RET-He

RET-He

● Reticulocyte haemoglobin equivalent

● Calculated from RET-Y

Sysmex – parametr Ret-He

Ret-He – r. 2005

20

Ret-He

21

Ret-He

22

Kontrola kvality

23

Klinické využití

24

Retikulocytární hemoglobin Nazývaný „krátkodobým ekvivalentem MCH“ – oproti MCH poskytuje

potřebnou informaci v horizontu dní

Retikulocyty v krevním oběhu pouze několik dní – díky svému rychlejšímu obratu jsou jejich parametry rychlejším a citlivějším indikátorem činnosti kostní dřeně (zejména její schopnosti využívat železo k syntéze hemoglobinu)

Zvýšené hodnoty retikulocytů pouze informují o počínající reakci kostní dřeně na stimulaci, nic však nevypovídají o skutečné kvalitě retikulocytů – obsahu hemoglobinu v nich

Prokazuje utilizaci železa ve tvorbě hemu, může být indikátorem nedostatku železa v kostní dřeni podobně jako barvení na železo v KD (Fishbane S., Mast A. E., Blood 2002)

Sledování erytropoetické aktivity kostní dřeně

obsah hemoglobinu v retikulocytech odráží aktuální stav a kvalitu erytropoézy

Poskytuje informace o hemoglobinizaci v průběhu erytropoézy v reálném čase

Diagnostika a monitorace léčby anemie z nedostatku železa, optimalizace léčby železem

Účinný parametr při monitoringu kinetiky železa

Časná diagnostika funkčního nedostatku železa, odlišení funkčního a nefunkčního nedostatku železa

Účinný parametr pro optimalizaci a racionalizaci léčby erytropoetinem, zejména u pacientů podrobujících se chemoterapeutické léčbě a u dětí

Obdoba glykemie a % HbA1c

Klinické využití Ret-He

Retikulocytární hemoglobin vs. klasické parametry metabolismu Fe

Sérové železo

Sérový feritin – zásoby železa v organismu

Saturace transferinu – prezentuje mobilizaci železa

Solubilní transferrinový receptor (sTfR) a sTfR-F index (sTfR/log ferritin)

Hepcidin

Zn Protoporfyrin

RET-He - není ovlivněn reakcí akutní fáze, obsah hemoglobinu v retikulocytech je snížen bez ohledu na přítomnost či nepřítomnost zánětu

dle dosud publikovaných údajů je největší klinické využití v oblasti léčby dialyzovaných pacientů EPO

1997 „FDA approved“: metoda validovaná pro pacienty podstupující hemodialýzu

Nefrolofická guidelines (Evropské pokyny pro osvědčené postupy (EBPG) nebo iniciativa

pro kvalitu výsledků vyšetření ledvinových onemocnění, National Kidney Foundation Kidney Disease Outcome Quality Initiative (NKF KDOQI).

Klinické využití - nefrologie

29

Klinické využití - pediatrie

Klinické využití - gravidita

Refereční rozmezí: 28 -35 pg (Sysmex) ◦ Hodnoty nižší než 28 pg se považují za projev funkčního nedostatku železa

Vydávání výsledků pro klinická pracoviště od 6. 4. 2016

Počet vyšetření RET-He: cca 130 RET-He /měsíc

FN Brno

Závěr

32

Měření RET-He je rychlé, časově nenáročné

Nízké náklady pro laboratoře i zdravotní pojišťovny ◦ 96857 – stanovení počtu retikulocytů na automatickém

analyzátrou – 66 bodů

◦ Vykazovat s KO

Časný ukazatel onemocnění/odpovědi na léčbu: dříve než klinické hematologické či biochemické ukazatele

Vysoká výpovědní hodnota ◦ 100% citlivost pro diagnostiku deficitu železa

◦ 80% specifita pro diagnostiku deficitu železa

Shrnutí

Poděkování

Děkuji za pozornost

35