Seminář 7: diagnostika Seminář 7: diagnostika autoimunitních chorob IIautoimunitních chorob IISeminář 7: diagnostika Seminář 7: diagnostika autoimunitních chorob IIautoimunitních chorob II

Testy autoimunityTesty autoimunityTesty autoimunityTesty autoimunity

Stanovení autoprotilátek• antinukleární protilátky (ANA)• revmatoidní faktor (RF)• protilátky proti erytrocyt ům (Coombs)• imunohistochemie• (protilátky proti thyreoglobulinu)

IMUNITNĚ ZPROSTŘEDKOVANÉ ANÉMIEIMUNITNĚ ZPROSTŘEDKOVANÉ ANÉMIEIMUNITNĚ ZPROSTŘEDKOVANÉ ANÉMIEIMUNITNĚ ZPROSTŘEDKOVANÉ ANÉMIE

typ onemocn ění Coombs ův testIgG C3

primární autoimunitní hem. anémie + ±

sekundární sou část SLE ± -

vyvolaná léky ± -

postinfek ční ± -

neonatální izoerytrolýza + ±

prim/sekund. nemoc chladových aglutinin ů - +

COOMBSŮV TEST PROTILÁTEK PROTI COOMBSŮV TEST PROTILÁTEK PROTI ERYTROCYTŮM ERYTROCYTŮM

COOMBSŮV TEST PROTILÁTEK PROTI COOMBSŮV TEST PROTILÁTEK PROTI ERYTROCYTŮM ERYTROCYTŮM

� 2% promytá suspenze Ery vyšet ř. psa v PBS

� Coombsovo reagens (Goats anti Canine IgG, IgM, C3) 1:1 až 1:40 v PBS

� 50 µµµµl 2% ERY + 50 µµµµl vy řed. Coombs. reagens v mikrotitr. desce

� 30min 37 oC, 30min 25 oC

� makroskopicky a mikroskopicky ode číst aglutinaci

COOMBSŮV TEST PROTILÁTEK PROTI COOMBSŮV TEST PROTILÁTEK PROTI ERYTROCYTŮM ERYTROCYTŮM

COOMBSŮV TEST PROTILÁTEK PROTI COOMBSŮV TEST PROTILÁTEK PROTI ERYTROCYTŮM ERYTROCYTŮM

COOMBSŮV TEST PROTILÁTEK PROTI COOMBSŮV TEST PROTILÁTEK PROTI ERYTROCYTŮM ERYTROCYTŮM

COOMBSŮV TEST PROTILÁTEK PROTI COOMBSŮV TEST PROTILÁTEK PROTI ERYTROCYTŮM ERYTROCYTŮM

COOMBSŮV TEST PROTILÁTEK PROTI COOMBSŮV TEST PROTILÁTEK PROTI ERYTROCYTŮM ERYTROCYTŮM

COOMBSŮV TEST PROTILÁTEK PROTI COOMBSŮV TEST PROTILÁTEK PROTI ERYTROCYTŮM ERYTROCYTŮM

Regenerativní typ anémieRegenerativní typ anémie

DIFERENCIÁLNÍ DIAGNOSTIKA ANÉMIÍDIFERENCIÁLNÍ DIAGNOSTIKA ANÉMIÍDIFERENCIÁLNÍ DIAGNOSTIKA ANÉMIÍDIFERENCIÁLNÍ DIAGNOSTIKA ANÉMIÍpredispozicepredispozice

klinické p říznaky anémie (únava, apatie, zbarvení sliznic a k ůže, srdeční šelest)

hematologické znaky anemie (hematokrit, hemoglobin, počet a tvar erytrocyt ů – přítomnost vývojových forem v krvi - retikulocyty)

< 5 dní > 5 dní

akutní krvácenínebo hemolýza

onemocn ění kostní d řeně(parvovirus, estrogeny, nádorové)

autoimunitní RBC

hemolýza

hemolytická anémiebiopsie kostní d řeně

regenerativní anémieneregenerativní anémie

ztráty krve

hemobartonelóza babesióza

(CRF, hypotyreóza)onemocn ění mimod řeňová

hemolytická anémie

autoaglutinacesférocytózaCoombs ův test

Další p říčiny• léky / toxiny

pozitivní negativní

(ANA)

SLE

Coombs pozitivníIMHA

• léky nebo vakcíny• infekce, paraziti• transf ůze

AIHA Coombs negativníIMHA

AUTOIMUNITNÍ CHOROBY KŮŽEAUTOIMUNITNÍ CHOROBY KŮŽEAUTOIMUNITNÍ CHOROBY KŮŽEAUTOIMUNITNÍ CHOROBY KŮŽE

Choroba Sliznice Nik.t IgG a C3 Prognóza

P.Vulgaris ++++++++ ++++ mezibun ěčné ±±±±

P. Vegetans −−−− ±±±± m hlubší +

P. Foliaceus ±±±± + m horní ±±±±

P. Erythematosus ++++ ±±±± m, bm ±±±±

Bulózní pemfgoid ±±±± −−−− bazální m ±±±±

SLE ++++++++ ±±±± m, bm ±±±±, -

Dermatomyozitida −−−− −−−− +, ±±±±

Pemfigus foliaceusPemfigus foliaceus

IMUNOHISTOCHEMIE IMUNOHISTOCHEMIE IMUNOHISTOCHEMIE IMUNOHISTOCHEMIE

� odběr vzorku – biopsie, cytologický nát ěr a pod.

�� konjugát konjugát anti anti Dog Ig/FITCDog Ig/FITC (Binding Site)(Binding Site)

�� inkubace 30 min. p ři 25 inkubace 30 min. p ři 25 ooC ve vlhké kom ůrceC ve vlhké kom ůrce

�� opláchnutí a promytí PBSopláchnutí a promytí PBS

�� zamontování pod krycí sklo s 80% glycerolemzamontování pod krycí sklo s 80% glycerolem

�� prohlížení ve fluorescen čním mikroskopu p ři 480 nmprohlížení ve fluorescen čním mikroskopu p ři 480 nm

vazba sekundární protilátky, zna čené fluoresceinem, na protilátku primární vazba sekundární protilátky, zna čené fluoresceinem, na protilátku primární

→Primární protilátka→

Sekundární protilátka→ ← FITC

VYUŽITÍ IMUNOHISTOCHEMIE VYUŽITÍ IMUNOHISTOCHEMIE VYUŽITÍ IMUNOHISTOCHEMIE VYUŽITÍ IMUNOHISTOCHEMIE

� kožní onemocn ění (pemfigus, SLE)

� idiopatické zán ěty st řeva

� glomerulonefritidy

� myositidy

INTERCELULÁRNÍ SUBKORNEÁLNÍ U BAZÁLNÍ MEMBRÁNY

Pemfigus vulgaris Pemfigus foliaceus Bulózní pemfigoi d

GLOMERULONEFRITIDYGLOMERULONEFRITIDYCHRONICKÉ IDIOPATICKÉ ENTERITIDYCHRONICKÉ IDIOPATICKÉ ENTERITIDY

� lymfocytární-plasmacytární enteritida� nejčastšjší p říčina zvracení u ps ů, � průjem, ch řadnutí, úbytek hmotnosti� hypertrofie krypt, lymfocyty, plazmatické b. v mukó ze

� eozinofilní gastroenterokolitida� hypersenzitivitida I. typu?� atrofie klk ů s infiltrací eozinofily a histiocyty

� granulomatózní enterokolitida� fokální zán ět terminálního ilea� atrofie klk ů, hypertrofie krypt, granulomatózní zán ět, ulcerace

� histiocytární ulcerativní kolitida� u boxer ů, fr. buldo čků, � ulcerativní kolitida s infiltrací makrofágy s velký mi vakuolami

PAS+

CHOROBY ENDOKRINNÍHO SYSTÉMUCHOROBY ENDOKRINNÍHO SYSTÉMU

� autoimunitní hypothyreóza (Hashimotova choroba)� u psů, autoprotilátky proti thyreoglobulinu a thyreoidál ní

peroxidáze

� autoimunitní hyperthyreóza (Gravesova choroba)� u ko ček, autoprotilátky proti TSH receptoru

� diabetes mellitus I. typu� autoimunitní povaha u zví řat relativn ě vzácná� autoprotilátky proti Langerhansovým bu ňkám

� diabetes mellitus II. typu� autoprotilátky proti inzulinovému receptoru

PACIENT 4497 am.kokr, pes, stá ří 6 letPACIENT 4497 am.kokr, pes, stá ří 6 let

anamnézaanamnéza�� apatie, nechutenství, poslední apatie, nechutenství, poslední

vakcinace p řed rokemvakcinace p řed rokem

příznakypříznaky�� tachykardie, tachypnoetachykardie, tachypnoe�� ikterusikterus�� splenomegáliesplenomegálie

icterus

PACIENT 4497 am.kokr, pes, stá ří 6letPACIENT 4497 am.kokr, pes, stá ří 6let

biochemiebiochemie�� bilirubinémiebilirubinémie�� mírn ě zvýšené jaterní testymírn ě zvýšené jaterní testy�� bilirubinurie, hemoglobinuriebilirubinurie, hemoglobinurie

hematologiehematologie�� regenerativní anémie (ery 2,8 x 10regenerativní anémie (ery 2,8 x 10 1212/l)/l)�� leukocytóza (leu 20,5 x 10leukocytóza (leu 20,5 x 10 99/l) /l)

imunologieimunologie�� Coombs testCoombs test p římýpřímý 1:16 +1:16 +

DIAGNÓZA: DIAGNÓZA: autoimunitní hemolytická anémieautoimunitní hemolytická anémie

PACIENT 1015 N.O., fena, stá ří 7 letPACIENT 1015 N.O., fena, stá ří 7 let

anamnézaanamnéza�� hubnutí, pruritus, kožní zm ěny, trvá min. 1/2 roku hubnutí, pruritus, kožní zm ěny, trvá min. 1/2 roku příznakypříznaky�� T: 38,5 vyhublost, apatieT: 38,5 vyhublost, apatie�� alopecie na r ůzných částech t ěla a kon četinalopecie na r ůzných částech t ěla a kon četin�� furunkulóza na h řbetě, břiše a v perianální oblastifurunkulóza na h řbetě, břiše a v perianální oblastihematologiehematologie�� Leu: Leu: 24,224,2 x 10x 1099/l, Ne: /l, Ne: 22,0 22,0 x 10x 1099/l, Ly: /l, Ly: 0,480,48 x 10x 1099/l,/l,mikrobiologie a parazitologiemikrobiologie a parazitologie�� seškrab parazitol. negat., mykologie chlup ů negat.,seškrab parazitol. negat., mykologie chlup ů negat.,�� S.intermediusS.intermediusimunologieimunologie�� Fag 88,5 %, CL: 62,8 / 207, BTL(SI): Fag 88,5 %, CL: 62,8 / 207, BTL(SI): 2,2, 2 ,2, 2,02,2, 2,2, 2,0�� Ig: Ig: 27,9 27,9 g/l, CIK: g/l, CIK: --, LYS: , LYS: 9,5 9,5 g/lg/l

DIAGNÓZA: DIAGNÓZA: hluboká pyodermie n ěmeckých ov čákůhluboká pyodermie n ěmeckých ov čáků

PACIENT 1072 N.O., fena, stá ří 2 r.PACIENT 1072 N.O., fena, stá ří 2 r.anamnéza� apatie, neochota pohybu, sklon k tloustnutí, kožní změny, první

vyšet ření asi po 1 m ěs. od vznikupříznaky� T: 38,5 D: n.d. P: n.d.� furunkulóza na pánevní kon četin ěmikrobiologie a parazitologie� seškrab parazitol. negativní, � bakteriologie ned ělánaimunologieimunologie�� Fag 80 %, BTL(SI): PhA Fag 80 %, BTL(SI): PhA 2,5, 2,5, ConA 10,8ConA 10,8, , PwM 3,5PwM 3,5�� Ig: Ig: 15,9 15,9 g/l, CIK: g/l, CIK: --, LYS: , LYS: 5,55,5 g/lg/lbiochemie� T4: < 10 nmol/l

DIAGNÓZA: hypothyreóza, hluboká pyodermie

PACIENT 4887 kříž., fena, stá ří 2 rokyPACIENT 4887 kříž., fena, stá ří 2 roky

příznakypříznaky�� anémieanémie�� petechiální hemoragiepetechiální hemoragie

biochemiebiochemie�� jaterní testy v norm ějaterní testy v norm ě

�� hemoglobinuriehemoglobinurie

hematologiehematologie�� regenerativní anémie (ery 1,9 x 10regenerativní anémie (ery 1,9 x 10 1212/l)/l)�� leukocytóza (leu 22,3 x 10leukocytóza (leu 22,3 x 10 99/l)/l)�� trombocytopenie trombocytopenie

imunologieimunologie�� Coombs testCoombs test p římýpřímý 1:16 +1:16 +

DIAGNÓZA: DIAGNÓZA: autoimunitní hemolytická anémie, Evans ův syndromautoimunitní hemolytická anémie, Evans ův syndrom

PACIENT 1260 retrívr fena stá ří 5 letPACIENT 1260 retrívr fena stá ří 5 let

anamnézaanamnéza�� dlouhodobé pohybové problémy, ob časné pr ůjmydlouhodobé pohybové problémy, ob časné pr ůjmy

příznakypříznaky

��Mírně zvýšená teplotaMírně zvýšená teplota

��Pohybové potíže, výrazný otok a bolestivost 3 kloub ůPohybové potíže, výrazný otok a bolestivost 3 kloub ů

��Při pohmatu citlivé, bolestivé b řichoPři pohmatu citlivé, bolestivé b řicho

RTGRTG

��neerozivní artritida neerozivní artritida

Imunologické vyšet řeníImunologické vyšet ření

��ANA test 1:1000 +, homogenní imunofluorescenceANA test 1:1000 +, homogenní imunofluorescence

Diagnóza: Diagnóza: Idiopatická artritida III. typu?Idiopatická artritida III. typu?

Ulcerativní kolittida s artritidouUlcerativní kolittida s artritidou

PACIENT 4922 kříž., pes, stá ří 3 rokyPACIENT 4922 kříž., pes, stá ří 3 roky

anamnézaanamnéza�� apatie, nechutenství, bolest b řicha, trvá asi 4 dnyapatie, nechutenství, bolest b řicha, trvá asi 4 dny

příznakypříznaky�� anémieanémie

biochemiebiochemie�� zvýšené jaterní testyzvýšené jaterní testy�� hemoglobinuriehemoglobinurie

hematologiehematologie�� regenerativní anémie (ery 2,6 x 10regenerativní anémie (ery 2,6 x 10 1212/l)/l)�� leukocytóza (leu 76,8 x 10leukocytóza (leu 76,8 x 10 99/l) /l)

imunologieimunologie�� Coombs testCoombs test p římýpřímý 1:32 +1:32 +

DIAGNÓZA: DIAGNÓZA: autoimunitní hemolytická anémieautoimunitní hemolytická anémie