Základní hematologická Základní hematologická vyšetřenívyšetření

Ústav patologické fyziologieÚstav patologické fyziologie

1.LF UK1.LF UK

Co vyšetřujeme?Co vyšetřujeme?

1.1. KrevKrev

2.2. Kostní dřeň Kostní dřeň

- aspirační punkce- aspirační punkce

- trepanobiopsie - trepanobiopsie

3.3. Lymfatické uzliny - extirpaceLymfatické uzliny - extirpace

Přehled metodPřehled metod

1.1. FWFW2.2. Krevní obrazKrevní obraz3.3. KoagulaceKoagulace4.4. CytochemieCytochemie5.5. Vyšetření metabolizmu FeVyšetření metabolizmu Fe6.6. Vyšetření metabolizmu HGBVyšetření metabolizmu HGB7.7. ImunologieImunologie8.8. Průtoková cytometriePrůtoková cytometrie9.9. Cytogenetika a molekulární biologieCytogenetika a molekulární biologie

Sedimentace erytrocytů (FW)Sedimentace erytrocytů (FW)

Rychlost sedimentace závisí na Rychlost sedimentace závisí na tvorbě agregátů tvorbě agregátů erytrocytů – penízkovatěníerytrocytů – penízkovatění (suspenzní stabilitě) (suspenzní stabilitě)

ZrychleníZrychlení - - fibrinogen, imunoglobuliny, CRP a fibrinogen, imunoglobuliny, CRP a jiné proteiny akutní fáze, anémiejiné proteiny akutní fáze, anémie

ZpomaleníZpomalení - - albumin, polycytémiealbumin, polycytémie

Metoda Fahreus-Westergrenova (Metoda Fahreus-Westergrenova (FWFW))

Norma:Norma: 2-5 mm/h u mužů 2-5 mm/h u mužů

3-8 mm/h u žen (3-8 mm/h u žen (↓ ery, ↑↓ ery, ↑ fibrinogen) fibrinogen)

Nespecifické vyšetření – screening, sledování Nespecifické vyšetření – screening, sledování průběhu (dynamiky) nemociprůběhu (dynamiky) nemoci

Krevní obraz (KO)Krevní obraz (KO)

HemoglobinHemoglobin ( (HGBHGB)) Hematokrit Hematokrit ((HCTHCT)) Počet erytrocytůPočet erytrocytů ( (RBCRBC)) Objem RBC (Objem RBC (MCVMCV)) Množství HGB v RBC Množství HGB v RBC

((MCHMCH)) Koncentrace HGB v RBC Koncentrace HGB v RBC

((MCHCMCHC)) Distribuční šíře RBC (Distribuční šíře RBC (RDWRDW)) Retikulocyty (Retikulocyty (retret))

Počet trombocytůPočet trombocytů ( (PLTPLT)) Distribuční šíře PLT (Distribuční šíře PLT (PDWPDW)) Objem PLT (Objem PLT (MPVMPV)) Počet leukocytůPočet leukocytů ( (WBCWBC)) Diferenciální rozpočet WBC Diferenciální rozpočet WBC

- segmenty a tyče- segmenty a tyče

- eozinofily- eozinofily

- bazofily- bazofily

- monocyty- monocyty

- lymfocyty - lymfocyty

kvantitativní vyšetření

kvalitativní vyšetření

Automatické stanovení hematologickými Automatické stanovení hematologickými analyzátoryanalyzátory

Jak funguje analyzátor ? Jak funguje analyzátor ?

- - impedančníimpedanční – při průchodu částice mezi elektrodami – při průchodu částice mezi elektrodami vzroste impedancevzroste impedance

- počet impulzů = počet částic- počet impulzů = počet částic

- amplituda = objem částice- amplituda = objem částice

- - optickéoptické – při průchodu částice přes fokusovaný – při průchodu částice přes fokusovaný světelný paprsek dojde k rozptylu světlasvětelný paprsek dojde k rozptylu světla

Klasický krevní nátěr Klasický krevní nátěr

- při patologickém nálezu na analyzátoru- při patologickém nálezu na analyzátoru - zhodnocení morfologie buněk- zhodnocení morfologie buněk

← sférocyty

schistocyty →

HemoglobinHemoglobin

Stanovení spektrofotometricky po hemolýze erytrocytů a přeměně na hemiglobinkyanid

Normální hodnotyženy: 120 – 160 g/lmuži: 130 – 175 g/l

Zvýšení: polycytémie, dehydratace

Snížení: anémie, hyperhydratace

HematokritHematokrit

HCT udává procentuelní zastoupení erytrocytů v objemové jednotce krve

(analyzátor vypočítá HCT z RBC a MCV)

Normální hodnotyženy: 0,35 – 0,46 35 - 46 % muži: 0,40 – 0,50 40 – 50 %

Zvýšení: polycytémie, dehydratace

Snížení: anémie, hyperhydratace

Počet erytrocytůPočet erytrocytů

udáván v množství x1012/l nebo x106/μl

Normální hodnotyženy: 3,8 – 5,2 x 1012/l muži: 4,2 – 5,8 x 1012/l

Zvýšení: polycytémie, dehydratace

Snížení: anémie, hyperhydratace

MCVMCV – – mmean ean ccell (corpuscular) ell (corpuscular) vvolumeolume

Výpočet:

- určen přímo analyzátorem !

Normální hodnota: 80 – 99 fl

Rozlišení - normocyty

- mikrocyty

- makrocyty

MCHMCH – – mmean ean ccell (corpuscular) ell (corpuscular) hhemoglobinemoglobin

Výpočet:

Normální hodnota: 27 – 33 pg

Rozlišení - normochromní RBC (normo nebo makrocyty)

- hypochromní RBC (většinou mikrocyty)

MCHCMCHC – – mmean ean ccell (corpuscular) ell (corpuscular) hhemoglobin emoglobin cconcentrationoncentration

Výpočet:

Normální hodnota: 33 - 37 %

Hodnocení obdobné jako u MCH

RDW – RDW – rred cell ed cell ddistribution istribution wwidthidth

Analyzátor vytvoří v paměti Priceovu-Jonesovu křivku, RDW Analyzátor vytvoří v paměti Priceovu-Jonesovu křivku, RDW je šířka distribuce (obdobně se stanovuje PDW)je šířka distribuce (obdobně se stanovuje PDW)

(RDW je mírou anizocytózy)(RDW je mírou anizocytózy)

3 5 7 9 11 13 um

poče

t norma

mikrocytární anémie

makrocytární anémie

Počet retikulocytůPočet retikulocytů

Stanovení z krevního nátěru obarveného brilantkrezylovou modří (počet / 1000 RBC)

(analyzátorem – absolutní hodnoty)

Normální hodnota: 0,5 – 1,5 %

Zvýšení: zvýšená tvorba RBC v kostní dřeni (krvácení, hemolýza)

Snížení až vymizení: útlum erytropoézy, útlum dřeně

Počet trombocytůPočet trombocytů

Udává se v množství x10Udává se v množství x1099/l nebo x10/l nebo x1033//μl

Normální hodnoty: 150 – 450 x 109/l

Zvýšení: trombocytóza

Snížení: trombocytopenie

Funkční porucha: trombocytopatie

Počet leukocytůPočet leukocytů

Udává se v množství x109/l nebo x103/μl

Normální hodnoty: 4 – 10 x 109/l

Zvýšení: leukocytóza

Snížení: leukopenie

Diferenciální rozpočet leukocytůDiferenciální rozpočet leukocytů

Udává zastoupení jednotlivých druhů leukocytů v krviUdává zastoupení jednotlivých druhů leukocytů v krvi

Vyjadřuje se v Vyjadřuje se v relativnímrelativním (%) nebo (%) nebo absolutnímabsolutním počtu počtu

Poruchy:Poruchy:

neutrofilie x neutropenie neutrofilie x neutropenie

eozinofilie x eozinopenieeozinofilie x eozinopenie

bazofilie x bazopeniebazofilie x bazopenie

lymfocytóza x lymfopenielymfocytóza x lymfopenie

AnémieAnémie

35 letá těhotná žena byla vyšetřena pro 35 letá těhotná žena byla vyšetřena pro progredující progredující únavuúnavu a a zadýchávánízadýchávání při při minimální zátěži. Klinické vyšetření až na minimální zátěži. Klinické vyšetření až na bledé spojivkybledé spojivky v normě. v normě.

Bylo vysloveno podezření na anémii, provedeno Bylo vysloveno podezření na anémii, provedeno vyšetření krevního obrazuvyšetření krevního obrazu

HGB 71 g/l HGB 71 g/l ((120 – 160 g/l)

HCT 23% HCT 23% ((35 - 46 %)

RBC 2,5 x 10RBC 2,5 x 1012 12 ((3,8 – 5,2 x 1012/l) MCV 74 fl MCV 74 fl ((80 – 99 fl)

MCH 22 pg MCH 22 pg ((27 – 33 pg)

RDW 17,1% RDW 17,1% (13 – 15 %)(13 – 15 %)

ret 0,2% ret 0,2% (0,5 – 1,5 %)(0,5 – 1,5 %)

WBC 5,4 x 10WBC 5,4 x 109 9 ((4 – 10 x 109/l) PLT 450 x 10PLT 450 x 109 9 ((150 – 450 x 109/l)

Který parametr krevního obrazu diagnostikuje anémii? Proč není anémie definována hodnotami RBC a HCT? Jak lze anémii na základě hodnot KO blíže charakterizovat?

mikrocytárníhypochromnís anizocytózouhypoproliferativní

Anémie(patofyziologická klasifikace)

hyperproliferativní(zvýšené ztráty)

hypoproliferativní(nedostatečná tvorba)

krvácení hemolýza

nedostatek erytropoetinu

porucha krvetvorné

tkáně

nedostatek faktorů

důležitých pro erytropoezu

Anémie(morfologická klasifikace)

mikrocytární(hypochromní)

normocytární(normochromní)

makrocytární

sideropenická anémie

talasémie

anémie chronických

chorob

deficit vitaminu B12

MDS jaterní choroby

hypotyreóza

deficit kyseliny listové

anémie chronických

chorobkrvácení

aplastická anémie

některé hemolytické

anémie

Vyšetření metabolizmu železaVyšetření metabolizmu železa

S-FeS-Fe S-feritinS-feritin S-transferinS-transferin

Saturace transferinuSaturace transferinu

Celková vazebná kapacita transferinuCelková vazebná kapacita transferinu (Solubilní transferinový receptor)(Solubilní transferinový receptor)

Vyšetření metabolizmu železaVyšetření metabolizmu železa

Tranzitní pool Fe je stanovován jako Tranzitní pool Fe je stanovován jako sérové železosérové železo (veškeré železo je vázáno na transferin) a jako (veškeré železo je vázáno na transferin) a jako TIBCTIBC (celková vazebná kapacita)(celková vazebná kapacita)

Pool Fe v zásobárnách je Pool Fe v zásobárnách je stanovován jako stanovován jako sérový feritinsérový feritin

Vyšetření metabolizmu železaVyšetření metabolizmu železa

TIBCTIBC se zvyšuje při sníženém Fe v séru (více se zvyšuje při sníženém Fe v séru (více neobsazeného transferinu) a při zvýšení sérového neobsazeného transferinu) a při zvýšení sérového transferinutransferinu

Saturace transferinuSaturace transferinu je vypočtená jako S-Fe/ TIBC je vypočtená jako S-Fe/ TIBC

sTfR vzniká proteolýzou membránového TfR, je nepřímým ukazatelem exprese TfR v organismu

=> zvýšen u deficitu železa a intenzivní erytropoézy

mikrocyty

mitózy

prodloužená hemoglobinizace

nedostatek Fe

Proč je sideropenickáanémie mikrocytární?

Proč je přítomna anizocytóza?

50 letá žena přichází pro 50 letá žena přichází pro zhoršení dechuzhoršení dechu v v několika posledních týdnech. Také si stěžuje několika posledních týdnech. Také si stěžuje na na mravenčení prstůmravenčení prstů na levé noze. Při na levé noze. Při fyzikálním vyšetření zjišťujeme fyzikálním vyšetření zjišťujeme žlutě žlutě zabarvené skléryzabarvené skléry, červený a , červený a vyhlazený jazykvyhlazený jazyk. .

Pro podezření na anémii byl vyšetřen krevní Pro podezření na anémii byl vyšetřen krevní obraz:obraz:

HGB 65 g/l HGB 65 g/l ((120 – 160 g/l)

HCT 19,3% HCT 19,3% ((35 - 46 %)

RBC 1,7 x 10RBC 1,7 x 1012 12 ((3,8 – 5,2 x 1012/l) MCV 114 fl MCV 114 fl ((80 – 99 fl)

MCH 33 pg MCH 33 pg ((27 – 33 pg)

RDW 22 % RDW 22 % (13 – 15 %)(13 – 15 %)

ret 0,4% ret 0,4% (0,5 – 1,5 %)(0,5 – 1,5 %)

WBC 2,0 x 10WBC 2,0 x 109 9 ((4 – 10 x 109/l) PLT 140 x 10PLT 140 x 109 9 ((150 – 450 x 109/l)

O jaký typ anémie se jedná?

Anémie(morfologická klasifikace)

mikrocytární(hypochromní)

normocytární(normochromní)

makrocytární

sideropenická anémie

talasémie

anémie chronických

chorob

deficit vitaminu B12

MDS jaterní choroby

hypotyreóza

deficit kyseliny listové

anémie chronických

chorobkrvácení

aplastická anémie

některé hemolytické

anémie

Vyšetření sérové koncentrace:Vyšetření sérové koncentrace:

vitaminu B12vitaminu B12

kyseliny listovékyseliny listové

Proč je anémie makrocytární?Proč je anémie makrocytární?

makrocyty

↑

prodloužená doba mezi bb děleními

↑

nedostatek kyseliny listové a vitaminu B12

HGB 65 g/l HGB 65 g/l ((120 – 160 g/l)

HCT 19,3% HCT 19,3% ((35 - 46 %)

RBC 1,7 x 10RBC 1,7 x 1012 12 ((3,8 – 5,2 x 1012/l) MCV 114 fl MCV 114 fl ((80 – 99 fl)

MCH 33 pg MCH 33 pg ((27 – 33 pg)

RDW 22 % RDW 22 % (13 – 15 %)(13 – 15 %)

ret 0,4% ret 0,4% (0,5 – 1,5 %)(0,5 – 1,5 %)

WBC 2,0 x 10WBC 2,0 x 109 9 ((4 – 10 x 109/l) PLT 140 x 10PLT 140 x 109 9 ((150 – 450 x 109/l)

Proč má pacientka pancytopenii ?

Proč má pacientka parestézie?

hypochromní mikrocytární anémie

makrocytární anémie hypersegmentovaný neutrofil

Hemolytické anémieHemolytické anémie

Vyšetření metabolizmu hemoglobinuVyšetření metabolizmu hemoglobinu

S-bilirubinS-bilirubin – koncentrace odráží degradaci hemu – koncentrace odráží degradaci hemu (zvýšen u hemolytických anémií)(zvýšen u hemolytických anémií)

S-haptoglobin S-haptoglobin (váže hemoglobin)(váže hemoglobin) S-hemopexin S-hemopexin (váže hem)(váže hem)

(sníženy u hemolytických anémií)(sníženy u hemolytických anémií)

Elektroforéza hemoglobinu Elektroforéza hemoglobinu – zjištění abnormálních – zjištění abnormálních hemoglobinů (hemoglobin S)hemoglobinů (hemoglobin S)

Vyšetření antierytrocytových protilátekVyšetření antierytrocytových protilátek((→→ dg. autoimunitních hemolytických anémií)dg. autoimunitních hemolytických anémií)

Přímý antiglobulinový test (Coombsův)Přímý antiglobulinový test (Coombsův) - průkaz protilátek na povrchu erytrocytů pomocí - průkaz protilátek na povrchu erytrocytů pomocí

antiglobulinového séraantiglobulinového séra

Nepřímý antiglobulinový testNepřímý antiglobulinový test

- průkaz volných protilátek v séru (po inkubaci RBC se - průkaz volných protilátek v séru (po inkubaci RBC se sérem se přidá antiglobulinové sérum)sérem se přidá antiglobulinové sérum)

Imunologická vyšetřeníImunologická vyšetření

Vyšetření krevních skupinVyšetření krevních skupin

(Přímý antiglobulinový test)(Přímý antiglobulinový test) (Nepřímý antiglobulinový test)(Nepřímý antiglobulinový test)

Vyšetření krevních skupinVyšetření krevních skupin

ABO systémABO systém

- vyšetření RBC pomocí diagnostických sér anti-A - vyšetření RBC pomocí diagnostických sér anti-A

a anti-Ba anti-B

- vyšetření sérových aglutininů anti-A a anti-B pomocí - vyšetření sérových aglutininů anti-A a anti-B pomocí typových erytrocytůtypových erytrocytů

Rh(D) systémRh(D) systém

- vyšetření pomocí anti-Rh(D) séra- vyšetření pomocí anti-Rh(D) séra

bed-side test

CytochemieCytochemie

Průkaz látek v buňkách pomocí chemických reakcí, Průkaz látek v buňkách pomocí chemických reakcí,

hodnocení hodnocení periferní krve periferní krve i i kostní dřeněkostní dřeně

Reakce na železo (Perlsova reakce)Reakce na železo (Perlsova reakce)

- průkaz železa v erytroblastech (sideroblasty), - průkaz železa v erytroblastech (sideroblasty), erytrocytech (siderocyty) a makrofázích (siderofágy)erytrocytech (siderocyty) a makrofázích (siderofágy)

Vyšetření některých enzymů (ALP, NE)Vyšetření některých enzymů (ALP, NE)

- dg. a dif. dg. hematologických malignit- dg. a dif. dg. hematologických malignit

Průtoková cytometrie (flow cytometry)Průtoková cytometrie (flow cytometry)

technika umožňující kvantitativně i kvalitativně analyzovat částice – buňky – v suspenzi. Umožňuje cíleně separovat buňky na základě jejich fyzikálních a chemických vlastností

FACS (Fluorescence-activated-cell-sorting) - třídění buněčné suspenze dle odlišného rozptylu světla a fluorescenční charakteristiky buňky

Užití v hematologii:

imunofenotypizace myeloproliferací a lymfoproliferací pomocí fluorescenčně značených monoklonálních protilátek

Děkuji za pozornost!Děkuji za pozornost!Dotazy?Dotazy?