Histologické zpracování trepanobiopsií na Ústavu patologie FN Olomouc

Bártová M., Vodičková L., Novotná D., Faltýnková A.

Bioptické zpracování trepanobiopsií

Proč se provádí?

U pacientů s chorobami krvetvorby

nádorového původu

nenádorového původu

Odběr materiálu, jeho fixace a odvápnění

Materiál se odebírá z lopatky kosti kyčelní

Hned po odběru se materiál vkládá do fixačního roztoku

Používáme Lőwyho roztok, který tkáň současně fixuje a odvápňuje

Příprava Lőwyho roztoku

Postup přípravy:20g chloridu rtuťnatého rozpustíme v 60ml vařící destilované vody. Přidáme 100ml 40% formaldehydu, 50ml kyseliny octové ledové a zbývající destilovanou voduLőwyho roztok skladujeme při 4°CRoztok je toxický – pozor při manipulaci!

Formaldehyd 40% 100ml

HgCl2 20g

Kyselina octová ledová 50ml

Destilovaná voda 850ml

Použití Lőwyho roztoku

1. Materiál se vkládá do tohoto roztoku již při odběru na oddělení

2. Je nutné, aby byl uveden přesný čas vložení tkáně do Lőwyho roztoku

3. Doba fixace a odvápnění se pohybuje mezi 20-24 hodinami

Další zpracování trepanobiopsií

Po 20-24 hodinách se vzorek tkáně zpracovává stejně jako jiný bioptický materiálV konečné fázi zpracování získáme parafinový blokNásleduje krájení řezů silných 2-3Rutinně u nás zhotovujeme 7 preparátů z každého vzorku a barvíme metodami:

Hematoxylin-eosinPAS reakcePerlsova metodaGiemsaGőmoryUnna-PapenheimNaftol-ASD-chloracetátesteráza

Barvení hematoxylin-eosin

Základní barvení pro orientaci ve tkáni

Výsledek: jádra – tmavě modře

cytoplazma – růžově červené

Používáme Weigertův železitý hematoxylin

HE 100×

HE 200×

PAS reakce

PAS reakcí se dobře zvýrazní megakaryocyty, jejichž cytoplazma se barví červenofialově.

PAS 400×

Průkaz železitého pigmentu

Perlsovou metodou

Umožňuje zhodnocení přítomnosti pigmentu – hemosiderinu – ve stromálních makrofázích a někdy v erytroblastech

Výsledek: železo – modře buněčné pozadí – v růžovém tónu

Fe 200×

Fe 400×

Giemsovo barvení

Dobře vykresluje buněčné struktury

Identifikuje mastocyty

Výsledek: eosinofilní složky – v různých odstínech růžové až

červené

bazofilní složky – v různých odstínech světle modré, až tmavě modré

Giemsa 100×

Giemsa 200×

Metoda Gőmory – impregnační metoda

Znázorňuje síť retikulárních vláken stromatu a umožňuje tak posoudit kvantitu retikulárních vláken

Za některých patologických stavů, například u myeloproliferativních onemocnění, dochází k výraznému zmnožení retikulárních vláken, někdy i kolagenních vláken až do obrazu dřeňové fibrózy = zvazivovatění

Výsledek: retikulární vlákna – černě jádra – červeně

Gömory 320×

Gömory 400×

Metoda Unna-Papenheim

Výsledek: cytoplazma plazmocytů – růžově červeně erytroblasty (hnízda erytropoézy) – růžově

červeně

Elias 640×

Průkaz naftol-ASD-chloracetátesterázy

U této metody je důležité barvící roztoky připravovat vždy čerstvé, těsně před použitímDůležité je pH roztoků, pokud neodpovídá požadované hodnotě pH 6.3, musí se upravitTato metoda je velice citlivá a je nutné dodržovat přesný postupDobarvení metylzelení

Výsledek: bílá krevní řada a mastocyty – červeně ostatní buněčné elementy – zeleně

CLAE 40×

CLAE 100×

CLAE 200×

Aplikace imunohistochemických metod

Výsledek imuno metod je po fixaci a odvápnění v Lőwyho roztoku velmi dobrý

Využití zejména u lymfoproliferativních chorob

Nejčastěji prokazované antigeny:

CD20; CD3; CD5; CD23; CD68; CD10; CD138; Bcl-2

Kappa, lambda – lehké řetězce imunoglobulinů, IgA, IgG, IgM

MPO-myeloperoxidáza – prokazuje bílou krevní řadu

Děkuji za pozornost